2020质粒的提取碱法.pptVIP

实验一 质粒的提取 ( 碱法 ) 3 学时 1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果及讨论 实验目的 ? 了解碱法提取质粒的原理； ? 掌握碱法提取质粒的方法。 实验原理 ? 质粒是一种细菌染色体外的、具有自主 复制能力的、共价闭合环状超螺旋结构 的小型 DNA 分子。碱裂解法提取质粒是 实验室常用的方法。 ? 这种方法是根据共价闭合环状质粒 DNA 与线性染色体 DNA 在拓扑学上的差异来 分离它们。 结构的三大要素： ? 多克隆位点 ? 选择标记（耐药性， LacZ ） ? 独立的复制单位 种类： ? 质粒 ? 噬菌体 ? 酵母人工染色体（ YAC ） ? 反转录病毒载体 ? 表达载体等 pBC SK map T- 载体 ? 在碱性条件（ pH 12.5 ）下，线性染色体 DNA 的双螺旋结构解开而变性，质粒 DNA 的氢键虽 然断裂但两条互补链彼此缠绕，紧密结合在一 起。当加入乙酸钾恢复至中性时，染色体 DNA 分子难以复性，而质粒 DNA 分子很快复性，离 心时染色体 DNA 与细胞碎片一起被沉淀出来， 而质粒 DNA 则留在上清液中。