实验四细胞显微操作技术课件.pptVIP

实验四 细胞显 微操作技术 外源基因导入 （基因沉默、过表达、转基因动物） 利用显微操作系统将外源目的基因（ DNA 或 RNA ）直接注入 到受体细胞或受精卵的核中，使外源基因整合到受体细胞 的基因组内，培养 / 筛选，获得转基因动物 / 性状分析； 显微注射是目前转基因效率较好的一种转基因方法，可直接 用不含有原核载体 DNA 片段的外源基因进行转移；外源基 因的长度不受限制 , 可达 100 kb ；实验周期相对比较短。它 的不足之处是：需要昂贵精密的设备；显微注射操作复杂； 导入外源基因整合位点和拷贝数无法控制；常导致插入位 点附近宿主 DNA 片段缺失、重组等突变，可造成动物严 重的生理缺陷。 三 、实验材料 斑马鱼 Danio sp. 胚胎 2-cell 4-cell 8-cell 主要仪器和用具 倒置显微镜；显微操作仪；拉针仪 主要试剂 酚红 / 曙红 显 微 操 作 仪 四、显微注射操作过程 ? 注射针制备 ? 注射针内装液 使用无菌的微量加样器从微注射针的后部加入待注射样品； ? 注射针安装和定位 （ 1 ）将装液后的针头游离端安在连接器上，然后旋紧连接器以固定针头， 再将其固定到微操作仪的托针管上； （ 2 ）把载有待注射样本的培养皿放在显微镜载物台上，用低倍物镜对准 细胞调焦； （ 3 ）显微镜下使用微操作仪移动注射针，直到 针头的阴影在视野的中心 上方 ； （ 4 ）使用工作用放大倍数， 调准焦距，找到细胞和针尖 。 ? 显微注射 （ 1 ）使针尖对准细胞的待注射部位（ 细胞与针尖在同一焦面上 ），旋转 推进旋钮，针刺入细胞内（卵膜、细胞膜、核膜）； （ 2 ）旋转加样旋钮，将样本加入，并离开细胞。 注射 作 业 ? 简述细胞显微注射过程以及注意事项 ? 显微拍照注射前后的胚胎 ? 请于 9 月 14 日下午 5 点前提交报告 99/OpenClass