维生素C尿负荷试验.docVIP

维生素C尿负荷试验 （一）目的及意义：评价被检者维生素C的营养状况。 （二）原理： 还原型抗坏血酸具有还原性，能还原2,6-二氯酚靛酚染料。该染料在酸性溶液中呈红色，被还原后红色失去。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢型抗坏血酸。一定量的尿样能还原标准染料的量与样品中所含抗坏血酸的量成正比。 成人尿负荷4小时（口服500mg抗坏血酸） 不足 3mg 正常 3~10mg 充裕 10mg （三）仪器与试剂 容量瓶（50ml）；微量滴定管；三角烧瓶（50ml）；吸管等 1%草酸溶液；0.02％ 2,6-二氯酚靛酚溶液；标准抗坏血酸溶液 （四）操作步骤 （1）样品制备 晨起空腹时被检者排出晨尿后，口服500mg抗坏血酸，收集其后4小时尿液。在尿液中加入一定量草酸，置于4度保存。 （2）溶液配制 VC应用液配制 取1ml VC储备液（1mg/ml)→50ml容量瓶，以1%草酸溶液定容。 （3）空白试验 取10ml 1％草酸溶液→三角瓶，以染料滴定至粉红色，记录用量（C）。 （4）染料标定 取5ml VC应用液和5ml 1％草酸溶液于三角瓶，以染料滴定至粉红色，15s不褪色为终点，记录用量（A）。 （5）以吸管吸取尿样2~5ml至50ml三角瓶，加入1%草酸5ml。 （6）立即用标定过的2,6-二氯酚靛酚染料滴定之，直至淡粉红色15s不褪色为终点，记录染料用量。做平行样。 （五）结果计算 计算T值 VC应用液浓度×用量 T= A－C 尿中还原型抗坏血酸排出量= （六）注意事项 操作要迅速，滴定要准确。 样品中可能含有其他物质能还原2,6-二氯酚靛酚染料，但还原染料的速度要比抗坏血酸慢，所以滴定时以15s不褪色为终点 （七）实验数据及处理 1. VC应用液浓度=0.02mg/mL; VC应用液用量=5㎎/mL； A=1.14 mL； C=0.20 mL； 4小时尿量=100mL； 2.染料滴定用量 滴定次数 起始刻度/ mL 终点刻度/ mL 用量/ mL 1 2.50 16.04 13.54 2 1.39 14.56 13.17 3. 0.02mg/mL×5mL T= 1.14 mL－0.20 mL =0.106 mg/mL 4.第一次滴定尿中还原型抗坏血酸排出量=（13.54-0.20）×0.106×100 =28.28mg 5 第二次滴定尿中还原型抗坏血酸排出量=（13.17-0.20）×0.106×100 =27.50 mg 5 尿中还原型抗坏血酸排出量平均值=（28.28+27.50）／2=27.89 mg （八）实验结果讨论与分析 1.实验测得尿中还原型抗坏血酸排出量为27.89 mg，大于10 mg，对照标准知被检者维生素C营养状况良好。 2.维生素C在体内不能自身合成，完全靠饮食摄入，被检者维生素C营养状况良好表明其在饮食中摄入维生素含量较高。 3.实验操作不够迅速，致使部分VC在空气中氧化，可能使实验结果偏小。 4.滴定终点判断及读数不够准确，导致实验结果有误差。 5.样品中可能含有其他物质能还原2,6-二氯酚靛酚染料，使实验结果偏小。