仪器研究高效液相色谱法测定饮料中咖啡因含量.docx

反相高效液相色谱法测定饮料中的咖啡因的含量 .、八 、- 刖言： 本次实验报告在前言中简单阐述 HPLC基本原理，介绍HPLC仪器的结构 特点和应用范围；研究对象的化学结构、理化常数和文献报道测定方法。 b5E2RGbCAP 咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称 1,3,7-三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖 啡中提取而得的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含咖啡因 1.2% — 1.8 %,茶叶约含2.0% — 4.7 %。可乐、APC药片中均含有咖啡因。其分子式为 C8H 10O2N4,结构式：plEanqFDPw 一、 仪器与试药 高效液相色谱仪 ＜日本岛津）。 咖啡因对照品；甲醇为色谱纯；百事可乐 ＜康师傅乌鲁木齐饮品有限责任公 司）；红牛 ＜红牛维他命饮料有限公司）；叶尔羌茶 ＜新疆叶尔羌茶有限责任公 司）。DXDiTa9E3d 二、 方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱：C18＜4.6x150mm, 5即），流动相：甲醇：水=30:70, 测定波长280nm,柱温30°C，流速：1ml/min，进样量：10卩L。RTCrpUDGiT 2.2系统适用性实验 取供试品20yL进样，记录色谱图，咖啡因峰的保留 时间为4.253 min，各峰与相邻峰的 分离度为 ，拖尾因子为，符合药典规 定，理论塔板数按咖啡因峰计算大于 2000。对照品及供试品的色谱图如下： 5PCzVD7HxA ⑴对照品的色谱图 mV 0 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 min [Detector^^h1:2fl0n^T 8 0 80 i i ⑵供试品的色谱图 mV 14 _ Detecto^A^Ch^^280^^m 13 _： 12匚 11 J 10 9 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 min 2.3溶液制备 精密称取咖啡因对照品10mg加甲醇定容至10ml。吸取上述溶液0.5ml , 加甲醇稀释到10ml，则溶液浓度为50卩g/ml ojLBHrnAlLg 供试品溶液： ⑴百事可乐：取30ml的可乐放入烧杯中，用超声波脱气 15min,驱赶饮料 中的二氧化碳，用移液管精密移取 1ml的可乐脱气饮料，用水稀释至 10ml。 XHAQX74J0X ⑵红牛饮料：用移液管精密移取 1ml的红牛饮料，用水稀释至10ml。 ⑶取一包叶尔羌红茶，取 50ml沸水浸泡1小时，后取该溶液1ml,用水稀 释至25ml。 2.4方法学考察 2.4.1线性范围考察 分别量取贮备液5个以上浓度的样品，置于10ml容量瓶，稀释至刻度，得 到对应的浓度系列标准溶液。取上述系列浓度溶液经 0.22卩山的微孔滤膜过滤， 进样，得系列浓度对应峰面积和保留时间。以标准溶液的质量浓度 ＜X）为横坐 标，色谱峰面积＜Y）为纵坐标，绘制标准曲线，其线性方程为： Y=a+BX请将下 图中的线性方程在此写出） ，相关系数为 r= 0.9988 ，表明咖啡因在 0.4945-2.4725 浓度范围内线性关系良好。LDAYtRyKfE 表1 标准曲线 编号 1 2 3 4 5 浓度＜ 单 4.945 9.89 14.835 19.78 24.725 位） 峰面积 163089 265524 399522 539260 655983 2.4.2 加样回收率实验 ＜仅设计实验内容） 精密称量取9份已知含量的同批样品，分为 3组，按低、中、高浓度分别 加入咖啡因对照品储备液，均定容到一定体积后，进样测定，计算加样回收 率。用9个测定结果进行评价，一般中间浓度加入量与所取供试品含量之比控 制在I ： 1左右，其他两个浓度分别约为供试品含量的 80%和120% ■ Zzz6ZB2Ltk 表2回收率的实验结果 编号 样品含量 加入量 实测值 回收率 平均回收 RSD% 5 6 7 8 9 10 样品测定 取分别取样品3份，按照供试品溶液制备方法操作后， HPLC测定，结果 平均值为：264031。 测定是峰面积，请代入标准曲线算出样品浓度。 讨论 （1＞测得样品平均峰面积 A=264031，回归曲线y=25471x+26818, r=0.9988， 则得样品浓度C样＞=9.3131卩g/ml，即本可乐的咖啡因含量:93.131卩g/ml. （2＞标准曲线法的优点是：绘制好标准工作曲线后测定工作就变得相当简单， 可直接从标准工作曲线上读出含量，因此特别适合于大量样品的分析。 dvzfvkwMI1 标准曲线法的缺点是：每次样品分析的色谱条件 ＜检测器的响应性能，柱温，流 动相流速及组成，进样量，柱效等）很难完全相同，因此容易出现较大误差。 此