保健食品有助于调节肠道菌群功能检验方法2020.docxVIP

有助于调节肠道菌群功能检验方法 1 动物实验 1.1实验动物 推荐用近交系小鼠，18－22g，单一性别，每组10－15只。 1.2剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间14天，必要时可以延长至30天。 1.3 实验步骤 在给予受试样品之前，无菌采取小鼠肛门内粪便0.1g，10倍系列稀释，选择合适的稀释度分别接种在各培养基上。培养后，以菌落形态、革兰氏染色镜检、生化反应等鉴定计数菌落，计算出每克湿便中的菌数，取对数后进行统计处理。最后一次给予受试样品之后24h，与实验前同样方式取直肠粪便，检测肠道菌群，方法同上。 1.4 观察指标 体重、双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌。 1.5 数据处理和结果判定 资料可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 比较实验前后自身及组间双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌的变化情况，实验组实验前后自身比较差异有显著性，或实验后实验组与对照组组间比较差异有显著性、且实验组实验前后自身比较差异有显著性，符合以下任一项，可以判定该受试样品动物实验结果阳性。 1.5.1 粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭菌减少或不增加，肠杆菌、肠球菌无明显变化。 1.5.2 粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭菌减少或不增加，肠杆菌和/或肠球菌明显增加，但增加的幅度低于双歧杆菌/乳杆菌增加的幅度。 2 人体试食试验 2.1 受试者纳入标准 2.1.1 一个月内未患过胃肠疾病者。 2.1.2 一个月内未服用过抗生素者。 2.2 受试者排除标准 2.2.1 年龄在65岁以上者，妊娠或哺乳期妇女，过敏体质及对本保健食品过敏者。 2.2.2 合并有心血管、脑血管、肝、肾和造血系统等严重疾病及内分泌疾病，精神病患者。 2.2.3 停服受试样品或中途加服其它药物，无法判断功效或资料不全者。 2.2.4 短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。 2.3 试验设计及分组要求 采用自身和组间两种对照设计。按受试者的菌群状况随机分为试食和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、饮食因素等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。 2.4 受试样品的剂量和使用方法 试食组按推荐服用方法、服用量服用受试产品，对照组可服用安慰剂或采用空白对照。受试样品给予时间14天，必要时可以延长至30天。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。 2.5观察指标 2.5.1 安全性指标： 2.5.1.1 一般状况 包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等 2.5.1.2 血、尿、便常规检查 2.5.1.3 肝、肾功能检查（仅在试验开始前检查一次） 2.5.1.4 胸片、心电图、腹部B超检查（仅在试验开始前检查一次） 2.5.2 功效性指标：双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、拟杆菌、产气荚膜梭菌。 2.6 试验步骤：在给予受试样品之前，无菌采取受试者粪便1.0g，10倍系列稀释，选择合适的稀释度分别接种在各培养基上。培养后，以菌落形态、革兰氏染色镜检、生化反应等鉴定计数菌落，计算出每克湿便中的菌数，取对数后进行统计处理。最后一次给予受试样品之后24h，再次检测，方法同上。 2.7数据处理和结果判定 试验数据为计量资料，可用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；但变异系数太大（如CV50%）的资料应用秩和检验。 符合以下任一项，且试验组试食前后自身比较及试食后试食组与对照组比较，差异均有显著性，可以判定该受试样品具有有助于调节肠道菌群功能的作用。 2.7.1 粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭菌减少或不增加，肠杆菌、肠球菌、拟杆菌无明显变化。 2.7.2 粪便中双歧杆菌和/或乳杆菌明显增加，产气荚膜梭菌减少或不增加，肠杆菌和/或肠球菌、拟杆菌明显增加，但增加的幅度低于双歧杆菌/乳杆菌增加的幅度。 附：肠道菌群检验用培养基和培养方法（动物和人体通用） 项目 培养基 培养条件