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课题 2: 月季的花药培养 雄蕊 花药 花丝 柱头 花柱 雌蕊 花瓣 胚珠 子房 花托 萼片 图 1 花的基本结构 一、基础知识 (一)被子植物的花粉发育 1. 雄蕊 花丝 花药:囊状结构,内有很多花粉 由 花粉母细胞 经过 减数分裂 形成 2 . 花粉的概念 : 的 单倍体的生殖细胞 . 3 . 花粉发育阶段: 小孢子四分体时期;单核期; 双核期 4. 花粉的发育过程 小孢子四 分体时期 思考: 1. 被子植物花粉发育过程中的四分体时期与减数分裂的 四分体时期是同一阶段吗? 4. 花粉的发育过程 小孢子母细胞 (2n) 减数 ( ) 分裂 ( ) 小孢子四分体 时期 (n) ( 2 ) 个精子 (n) 有丝 分裂 ( ) 营养 细胞 (n) ( ) 生殖 细胞 (n) ( ) 单核 ( ) 期 (n) 居中 生殖 细胞核 (n) ( 花粉管 ( ) ) 细胞核 (n) 有丝 分裂 靠边 期 (n) ( 单核 ( ) ) 双核期 (n) (二)产生花粉植株的两种途径 ① 花药中 脱分化 的花粉 分化 胚状体 再分化 丛芽 诱导 花药中 脱分化 愈伤组织 ② 的花粉 丛芽 体细胞胚(胚状体):在组织培养过程中,某些细胞在形态上转 生根 移栽 变为与合子发育成的胚非常相似的结构,发育过程亦与合子胚类 似,胚芽,胚轴,胚根等结构完整,就像一颗种子 原因:培养基中的激素种类及浓度配比 (三)影响花药培养的因素 阅读 P38-39 思考: 诱导花粉植株能否成功及诱导成功的高低,主要 材料的选择 和 ___________- 培养基的组成 影响因素是 ____________ a. 材料选择什么时期最好,为什么? 花期为 初花期 , 花粉发育在 单核靠边期 , 成功率最高。 b. 如何选择单核期细胞? 选择完全未开放的花蕾 c . 为什么花瓣松动会给消毒带来困难? 微生物可能侵入花药,给材料消毒带来困难 d . 还有哪些影响花药培养的因素? 亲本植株的生长条件,材料的预处理及接种密度等 实验操作 一、材料的选取 二、材料的消毒 三、接种和培养 (一)材料选取 月季的初花期 1 、 从花药看 : 单核靠边期 从花粉看: 从花蕾看 : 完全未开放的 镜检 确定是否处于适宜的发育期。 2 、通过来 _____ 方法: 醋酸洋红法 ( 将染色体染成红色 ) 花药(载玻片上)→ 1% 的醋酸洋红 1 滴→用镊柄将花药捣碎, 盖上盖玻片→镜检(花粉粒的细胞核被染成红色) 焙花青 - 铬矾法 ( 花粉细胞核染成蓝黑色 ) 。 花药(在卡诺氏固定液中处理 20min )→取出,置于载玻片 上→ 焙花青-铬矾溶液染色 →盖上盖玻片→镜检(花粉粒的细胞 核被染成蓝黑色) (二)材料的消毒 花蕾 70% 的酒精 ( 大约 30s) 无菌水 ( 清洗 ) 无菌吸水 纸吸干 无菌水冲 洗 3~5 次 0.1% 的氯化汞 溶液 2~4min (三)接种和培养 思考: 1 、为何不能损伤花药且要彻底去除花丝? ①损伤花药,容易从受伤部位产生愈伤组织,即得不到单倍体 ②因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 2 、培养时需要注意哪些事项? ①每瓶接种花药 7~ 10 个,温度控制在 25 0 C 左右,不需要光 照。幼小植株形成后才需要光照。 ②花药开裂长出 愈伤组织或释放胚状体 。长出愈伤组织要及时转 移到 分化培养基上 ,释放的胚状体,必须在花药开裂后尽快将幼 小植株分开,否则这些植株将很难分开 ③在花药培养中,特别是通过愈伤组织形成的花粉植株, 染色 体组的数目常常会发生变化 . (主要原因是营养核和生殖核融合 造成的) 所以还需要对培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选。 课题成果评价 选材是否恰当 选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会 通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。 无菌技术是否过关
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