《临床检验基础》 3.联合检测原理 3.1.3 联合检测原理.pptxVIP

临床检验基础免疫学及临床检验教研室姓名 刘怡Email：7081413@一图示五种联合检测原理定义二 白细胞五分类计数原理 （1）容量、电导、光散射（VCS）原理 ①体积（V）测量技术：应用电阻抗原理测量细胞体积； ②电导（C）技术：采用高频电磁探针测量细胞内部结构，如细胞核、细胞质比例、细胞内颗粒； ③光散射（S）技术：激光源的单色光直接扫描计数敏感区细胞，根据细胞产生的不同角度散射光（10°～70°），提供细胞形态、胞核结构等光散射信息，并鉴别细胞颗粒的构型和颗粒质量，细胞粗颗粒的光散射要比细颗粒更强，以此区别粒细胞类型。图3-10 体积（V）、电导（C）和光散射（S）法图3-12 VCS异常细胞检测平面散点图位置图3-11 VCS细胞检测立体散点图（2） 双鞘流技术和细胞化学染色原理 ①标本在第一鞘流液中经过电阻抗分析，得到细胞体积，第二鞘流液对进行光吸收率分析，对细胞内容物进行测定。 ②溶血后对白细胞进行染色，染色后的标本进入鞘流池进行双鞘流分析，由于淋巴、单核、中性以及嗜酸细胞对染色剂的着色程度不同，细胞结构的光散射程度不同，产生特定吸光率。 ③嗜碱性粒细胞具有抗酸性，在WBC/BASO通道保持形态完整，其他白细胞胞质溢出成为裸核，根据电阻抗得到嗜碱性粒细胞直方图。（3） 激光散射和细胞化学染色原理 ①细胞被激光束照射时，因自身体积大小、细胞成分、细胞核密度、染色程度等的不同，阻挡或改变激光束的方向，产生与细胞特征相对应的各种角度的散射光。 ②细胞化学染色如POX通道，利用POX在不同白细胞中的含量不同，染色后出现不同程度的阳性或阴性，从而对细胞进行分类。（4） 电阻抗、射频、流式细胞术和细胞化学染色原理 射频（RF）是一种高频交流电磁波，反应细胞密度。流式细胞术（FCM）采用半导体激光照射在通过鞘流技术处理的细胞上，每个细胞产生三种信号，前向散射光（FSC）信号反映细胞体积大小，侧向散射光（SSC）信号反应细胞的颗粒和细胞核等内含物信息，侧向荧光（SFL）强度信号用于分析细胞内DNA和RNA的含量。①DIFF通道：中性、嗜酸、淋巴、单核细胞的检测通道。溶血剂使红细胞和血小板迅速溶解，并在白细胞膜上打出小孔及与嗜酸性颗粒结合，染料通过小孔进入白细胞与核酸及细胞器结合，通过激光照射，产生不同强度的荧光，荧光强度与细胞的核酸含量成正比。②WBC/BASO通道：用酸性试剂将红细胞处理掉，除嗜碱性粒细胞外其他白细胞均处理为裸核，利用FSC和SSC信号将嗜碱细胞分离出来，此通道同时可获得WBC总数。③IMI通道：由于幼稚细胞膜上脂质较成熟细胞少，在细胞悬液中加入硫化氨基酸后，幼稚细胞结合硫化氨基酸较成熟细胞多，且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂后成熟细胞易被溶解，幼稚细胞形态不受破坏，因此可通过电阻抗法检测出。（5）多角度偏振光散射方法 （MAPSS） 应用激光流式细胞术，分4个角度检测细胞。