食品中菌落总数的测定方法[借鉴].pdfVIP

食品中菌落总数的测定 一、实验目的 （1） 学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法 （2） 学会菌落总数的报告方式 二、实验材料 1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或 剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。 2、 培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨 5.0g、酵母浸膏 2.5g、葡萄糖 1.0g、琼脂 15.0g、蒸馏水 1000mL、pH 7.0±0.2 3、检样：利乐包装鲜牛奶 250ml 三、实验方法与步骤 1、检验程序 菌落总数检验程序： 检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择 2-3 个适宜稀释度各以 1ml 之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入 46℃15-20ml 营养琼脂→置 36±1℃恒温箱内培养（48±2）h 取出 → 菌落数→报 2、检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml 鲜牛奶，放于含有 225ml 灭菌生理盐水的 500ml 灭菌 玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成 1：10 的均匀稀释液。 （2）用 1ml 灭菌吸管吸取 1：10 稀释液 1ml，沿管壁徐徐注入含有 9ml 灭菌生理盐水的试管内（注意吸管 尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成 1：100 的稀释液。 （3）另取 1ml 的灭菌吸管，按上项操作顺序作 10 倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用 1 支 1ml 灭菌吸管。 －1 －2 （4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3 个连续适宜稀释度即 10、10 、10 ，分别在 作 10 倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移 1ml 稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿 15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检 样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有 1ml 稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h 取出，计算平板内菌落数目乘以倍 数，即得 1mL 样品所含菌落总数。 四、检样中细菌菌落总数的计算与报 1、菌落计算方法 （1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同 稀释度的各平板平均菌落总数。 （2）菌落计数的报 ①平板菌落数的选择 选取菌落数在 30～300 CFU 之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两 个平板平均数， ②稀释度的选择 应选择平均菌落数在 30～300 CFU 之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30～300 之间， 按以下公式计算： N = 样品中菌落数 ΣC = 含适宜范围 CFU 的平板菌落数之和 n = 第一稀释度（低稀释度）平板个数 1 n = 第二稀释度（高稀释度）平板个数 2 d = 稀释因子（第一稀释度） 若所有稀释度的平均菌落数均大于 300 CFU，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之， 若所有稀释度的平均菌落数均小于 30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报 若所有稀释度及样品原液均无菌落生长，则以小于 l 乘以最低稀释倍数报告之，若所有稀释度的平均菌落 数均不在 30～300 CFU 之间，其中一部分大于 300 CFU 或小于 30 CFU 时，则以最接近 30 CFU 或 300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报 菌落数小于 100 CFU 时，按 “四舍五入”原则修约，以整数报告。 菌落数大于或等于 100 CFU 时，第 3 位数字采用 “四舍五入”原则修约后，取前 2 位数字，后面用 0 代 替位数；也可用 10 的指数形式来表示，按 “四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报告。 3、实验结果与记录 菌