DNA检验用产品符合性测试、关于目前用于制造产品的后期处置有效性指南、用于DNA分析的相关标记.pdfVIP

GB/T ×××××— ×××× 附录A (规范性附录） 符合性测试 A.1 概述 符合性测试的目的是显示按照现有的法庭科学DNA 分析方法缺乏可扩增的人类DNA 片段，是否 因为有足够的数量干扰DNA 的分析。 检测方法应包括提取阳性和阴性对照，以及扩增阳性和阴性对照。 所使用的方法和DNA 分析试剂盒的细节可从相关的法庭科学实验室和试剂盒的制造商获得。 A.2 环境监测试验程序 采样区域的环境监测应用略微潮湿的棉签或等效的采样材料(如胶带)擦拭。抽样区域面积的大小和 位置应记录在案，并适用于被测试的物品。 在可能的情况下每个取样区域大小宜为10cm×10cm。 所用的提取方法应适用于DNA 含量水平较低的产品。提取的总DNA 量应满足使用适当的 qPCR 扩增方法或其他类似试验方法能够检测出人类DNA 。 所使用的测试程序应当经过验证，并证明适用于本标准。所有测试均应由受过训练、有能力、保持 培训记录的人员进行。 测试结果记录应至少应包括以下内容： a ）测试日期 b ）测试样品位置 c ）测试设备和方法 d ）识别测试实验室的细节（内部和外部） e ）分析控制 f ）测试结果(包括通过/失败) A.3 生产后处理的验证 该过程应包括加入相同已知量的人细胞(如培养细胞或白细胞)样品，其数量应足以从处理过和未处 理的样品中提取到人类DNA ，并通过qPCR 或相当、更灵敏的定量方法定量DNA ，以证明所需DNA 减少因子达到1000。 注1：10000 个细胞数量能够满足试验要求，大约是67ng 的DNA 。 有关样品类型、分析条件和结果解释的细节应记录并保存。 注2 ：qPCR 对样品分析可以在内部建立，也可以从商业供应商 （如法庭科学实验室和亲子鉴定实验室）获得。 A.4 产品测试 A.4.1 扩增试剂盒测试 应测试扩增试剂盒以显示试剂中不存在可扩增的人类DNA 。qPCR 定量试剂盒和PCR 试剂盒应使 用不含模板的DNA 样品进行测试，并根据制造商的建议进行最低限度的检测。 对于qPCR 定量试剂盒，高于检测限度的结果应视为失败。 对于PCR 试剂盒，结果应通过重复性试验确定。如果4 个重复中的2 个 （或等效）在读取区域内 显示1 个或更多个等位基因超过分析阈值，则判定为失败。 10 GB/T ×××××— ×××× A.4.2 DNA 提取试剂盒的检测 对于DNA 提取试剂盒，提取阴性对照应按照A.4.3 进行检测。 A.4.3 其他产品的测试 应测试适当的样品。在适用的情况下，应在DNA 提取方法中使用所鉴定的样品（例如完整的拭子 头）。所用的提取方法应适用于含低水平DNA 的样品。应优化洗脱液的量以最大限度地提高灵敏度。 注：洗脱液的适宜体积是25 μl 到100 μl 。 为保证产品测试结果，应使用下列方法之一： a)至少包含21 个或更多个相关STR 标记的DNA 分析试剂盒(见附件C)，并根据制造商的建议进行。 如果在读取区域出现2 个或更多个等位基因/峰，则应进一步调查以确定其是否是污染的结果(例如 重复或qPCR 检测) 。如果在读取区出现超过4 个等位基因/峰出现的分析阈值，则结果应判定为含有人 源性DNA 。 b)应使用包含人类引物、检测限至少为0.5pg/ul 的qPCR 系统。结果应该通过重复测试来确定。当 洗脱体积为100μl时，浓度等于50pg 或50pg 以上的结果应判定为含有人源性DNA 。 c)其他证明具有相当或更好的灵敏度的其他测试。