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吸光光度法概述和测量条件选择;第九章 吸光光度法(Spectrometer);作业: P271: 1、2、4、5、9、10、13;前 言;9.1 吸收光度法基本原理(Basic Principle of Spectrophotometer);光的波粒二象性;;表1 物质颜色与互补光颜色的互补关系;; 当光束照射到物质上时，光与物质发生相互作用，于是产生反射、散射、吸收或透射。如下图， 如被照射的是均匀溶液，则光的散射可以忽略。 ;物质对光吸收的本质;吸收光谱或吸收曲线(absorption,spectrum) 固定被测物质的浓度和吸光厚度，在不同的波长处测定其吸光度。以吸度为纵坐标，以测定波长为横坐标作图，即为吸收曲线。;吸收光谱 Absorption Spectrum;(a);9.1.3 光的吸收基本定律—朗伯-比尔定律; 1852年，Beer指出：光的吸收与吸光物质的数量有关；如吸光物质溶于不吸光的溶剂中，则吸光度与吸光物质的浓度成正比。即当单色光通过液层厚度一定的有色溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。这个关系称为比尔定律。; a-为吸光系数，单位为 L/g cm, b单位cm, c单位g / L。 κ-为摩尔吸光系数，单位为 L/mol.cm, c单位为mol/L;二、透光度T(transmittance);四、工作曲线;例：Fe(II)的质量浓度为5.0×10-4 g/L的溶液，与1，10-邻二氮杂菲反应，生成橙红色配合物。该配合物在波长508nm，比色皿厚度为2cm时，测得A=0.19。计算1，2-邻二氮杂菲亚铁的 a 和 κ;9.1.4 偏离朗伯比尔定律的原因; 测定时入射光的总强度为(I’0+I”0）,透射光的总强度 为(I1+I2)，因此所得吸光度值为：; 尽量选取吸光度随波长变化不大的谱带A的复合光进行测量，则A随波长变化小，κ的变化小，引起的偏离小，A与c基本为直线。若选用谱带B的复合光进行测量， κ的变化大，A与c的线性关系也差。;2、非平行入射光引起的偏离; L-B定律的基本假设要求溶液中吸光质点是独立的，彼此间无相互作用，因此稀溶液能很好地服从该定律。 高浓度时(0.01 mol/L)，由于吸收组分粒子之间的平均距离减小，相互影响邻近粒子的电荷分布，使吸光能力发生变化。即改变物质的摩尔吸光系数(κ)。 其相互作用的程度与浓度有关，浓度增大，??光度与浓度之间的关系偏离线性关系越大。所以一般认为比尔定律仅适用于稀溶液。;Cr2O72- + H2O = 2H+ + 2CrO42- （橙色） （黄色）;;二、光度计及基本部件;吸光光度法概述和测量条件选择;比色池盒;紫外可见分光光度计; 光度计的基本部件和光学示意图;各部件的作用及主要性能;将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。 由棱镜或光栅等单色元件及狭缝和透镜组成。;;各部件的作用及主要性能;4 检测 系统;三、分光光度计的类型;9.3 显色反应及显色条件的选择;1 显色剂用量;2 酸 度; 光度分析中，共存离子如本身有颜色，或与显色剂作用生成有色化合物，都将干扰测定。 消除方法： (1)加入络合掩蔽剂或氧化还原掩蔽剂，使干扰离子生成无色络合物或无色离子。 (2)选择适当的显色条件以避免干扰。 (3)分离干扰离子。 (4)可选择适当的光度测定条件(波长和参比)，消除干扰离子的影响。;9.3.3 显色剂;有机显色剂的类型;铬天青S结构式;多元配合物及应用特性简介;9.4 吸光度测定条件的选择;三、吸光度读数范围的选择;假设ΔT为常数，上式可以写为：;9.5 吸光光度法的应用;;三、络合物组成及稳定常数的测定;2、等摩尔连续变化法;3、络合物稳定常数的测定;四、酸碱离解常数的测定;整理得：;五、双波长分光光度法;故由双波长光度计测得：