柱层析法原理和方法生物学自然科学专业资料.pptVIP

柱层析法的原理和方法  原理 柱层析是化合物在液相 和固相之间的分配,属 于固-液吸附层析 ·利用固定相对液体相中 的各组分吸附能力不同, 时间增加 从而以不同速度向下迁 56色层的展开 移,形成若干色带,分 别收集  操作 1.装柱 溶剂 湿法 干法 层析柱 1将溶剂装入管1.管上端放一漏 内 2将吸附剂和溶2.将硅胶装入 剂调管中 调成浆状,倒入3轻敲管壁使之 填装均匀 3使溶剂流出, 吸附剂下沉  吸附剂 种类:氧化铝、硅胶,氧化镁、碳酸钙和活性炭等 氧化铝有酸、碱、中性。适用于不同类型化合物 的分离。 硅胶没有酸碱性之分,可适用于各类有机物的分 离  吸附剂的选择 a.与被吸附物及展开剂均无化学作用(首要) b吸附能力的大小(颗粒大小) C.吸附剂的活性(含水量) d.分子极性  干法 湿法 溶于小极性 适用范围任何化合物 溶剂的化合 物 1将溶剂旋干 2. 2加少量溶剂溶解(样品样品溶液用 操作 溶解性好) 滴管均匀加上 3加入硅胶吸附至硅胶不入 样 附着在瓶壁上 4.旋干 样品紧实, 优点 保证样品层很平整 不易产生裂 缝 缺点 硅胶和样品间易产生气泡适用范围窄  3淋洗 洗脱剂的选择:根据点板的比移值(简称R值) R,值=原点到所需要点的中心距