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单抗 N糖谱测定法 第一法 亲水相互作用色谱法 本法系通过 N糖苷酶 F（PNGase F）对单抗 N糖进行酶切、对酶切的 N 糖进行标记衍生，然后用超高液相色谱法对单抗 N糖谱进行测定。 照高效液相色谱法（通则 0512）测定。 试剂 N 糖苷酶 F（PNGase F） 2- 氨基苯甲酰胺 (2-AB) 标记溶液 : 取 350μl 二甲基亚砜 DMSO）和 150 μl 乙酸，混均。精密称取 25 mg 2-AB 加入上述溶液中，充分溶解。精密称取 30 mg 氰基硼氢化钠加入上述溶液中，充分溶解（可适当加热）。 系统适用性对照品。色谱条件 用酰胺基键合硅胶填充色谱柱，柱长 150mm，内径 2.1mm，粒度 1.7 μm，或等效色谱柱；柱温为 60℃，供试品保存温度为 2～8℃；以 50 mmol/L 的甲酸铵溶液（ pH4.5）为流动相 A 液，以乙腈为流动相 B液，梯度洗脱 60.0 分钟（梯度表）；荧光检测器检测，检测波长 为：激发波长 330nm，发射波长 420nm，增益 10。 系统适用性对照品溶液的制备 ( 1 )N 糖的酶切 准备 30kD的超滤离心管，加入 150μl 的超纯水，每分钟 13000 转 离心 5 分钟（舍弃残留有大体积液体的超滤管，并处理新的超滤 管）。加入 200μl 10mg/ml 的样品至超滤管中，每分钟 13000