仪器分析技术 HPLC操作使用 HPLC的操作使用.pptxVIP

HPLC的操作使用;岛津LC-10AT高效液相色谱仪;所需的流动相用0.45um滤膜过滤，超声脱气20 min。 样品和标准溶液，用0.45 um滤膜过滤。 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。;接通电源，依次开启电源、B泵、A泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑，最后打开色谱工作站。;波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按“func”键，用数字键输入所需波长值，按“Enter”键确认。按“CE”键退出。 流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按“func”键，用数字键输入所需的流速(柱在线时流速一般不超过1 mL/min),按“Enter”键确认。按“CE”键退出。 流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按“conc”键，用数字键输入流动相B的浓度值，按“Enter”键确认。按“CE”键退出。;梯度设定： ①在A泵显示初始屏幕时，按“edit”键。 ②用数字健输入时间，按“Enter”键，重复按“func”???选择所需功能，(FLOW“设定流速,”BCNC“设定流动相B的浓度值，按”Enter”键，用数字健输入设定值，按“Enter”键。 ③重复上一步设定其他时间步骤。 ④用数字键输入停止时间。重复按“fune”健直至屏幕显示STOP”，按Enter”健。;将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中 逆时针转动A/B泵的排液阀180”，打开排液阀 按A和B泵的“purge”键，pump”指示灯亮，泵大约以9.9mL/min的流速冲洗，3min后自动停止 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀;如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5 mL/min,按“pump”键，冲洗3 min后再按“pump”键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。;查看基线： ①按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件。 ②输入实验信息并设定各项方法参数。 ③按下“数据收集”页的“查看基线”按钮 。;等度洗脱方式： ①按A泵的“pump键，A、B泵将同时启动，“pump”指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。 ②检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。 ③观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1 MPa。若超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。 ④观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min,噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 ;梯度洗脱方式： ①以检验方法规定的梯度初始条件，按上面方法平衡系统。 ②在进样前运行1~2次空白梯度。方法，按A泵的“uw”,“or.u”指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，“prog.run”指示灯灭。;进样前按检测器“zero”键调零，按软件中“零点校正”按钮校正基线零点，再按一下查看基线”按钮使其弹起。 用样品溶液清洗注射器，并排出气泡后抽取适量即可以进样了。 含量测定的标准溶液和样品溶液每份至少注样2次。;外标法：把待测组分的纯物质配成不同浓度的标准系列，在一定操作条件下分别向色谱柱中注入相同体积的标准样品，测得各峰的峰面积或峰高，绘制A-c或h-c的标准曲线。在完全相同的条件下注入相同体积的待测样品，根据所得的峰面积或峰高从曲线上查得含量。;分析完毕后，先关检测器和色谱工作站，再用经过滤和脱气后的溶制清洗色谱系统，正相柱一般用正己烷，反相柱若使用混合流动相，则先用水冲洗，然后用甲醇-水冲洗，冲洗前先按（“4.更换流动相并排气泡”）操作，再用分析流速冲洗，各种溶剂一般冲洗15~30min，特殊情况应延长冲洗时间。;冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。 关断电源，做好使用记录，内容包括日期、样品名称、流动相、柱压、使用小时数、仪器完好状态等。;谢 谢