综合测定方法.docxVIP

PAGE PAGE # 实验1植物体内硝态氮含量的测定 植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况， 常作为施肥指标。另外，蔬菜类作物 特别是叶菜和根菜中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害健 康。因此，硝酸盐含量又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。 测定植物体内的硝态氮含量， 不仅能够反映出植物的氮素营养状况，而且对鉴定蔬菜及其加工品质也有重要的意义。 传统的硝酸盐测定方法是采用适当的还原剂先将硝酸盐还原为亚硝酸盐， 再用对氨基苯 磺酸与a -萘胺法测定亚硝酸盐含量。此法由于影响还原的条件不易掌握，难以得出稳定的 结果，而水杨酸法则十分稳定可靠，是测定硝酸盐含量的理想选择。 -、 原理 在浓酸条件下， NO3与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。其反应式如下: 生成的硝基水杨酸在碱性条件下( pH12)呈黄色，最大吸收峰的波长为 410 nm,在一 定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。 二、 仪器与用具 分光光度计；天平(感量0.1mg); 20ml刻度试管；刻度吸量管 0.1ml、0.5ml、5ml、10ml 各1支；50ml容量瓶；小漏斗($ 5cm) 3个；玻棒；洗耳球；电炉；铝锅；玻璃泡； 7cm 定量滤纸若干。 三、 试剂 500mg/L硝态氮标准溶液： 精确称取烘至恒重的 KNO 3 0.7221g溶于蒸馏水中，定容 至 200ml。 5%水杨酸一硫酸溶液：称取 5g水杨酸溶于100ml比重为1.84的浓硫酸中，搅拌溶 解后，贮于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。 称取15g水杨酸溶于300ml比重为1.84的浓硫酸中，搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置 冰箱保存一周有效 8%氢氧化钠溶液：80g氢氧化钠溶于1L蒸馏水中即可。 160g氢氧化钠溶于2L蒸馏水中即可。 四、 方法 标准曲线的制作 吸取 500mg/L 硝态氮标准溶液 1ml、2ml、3ml、4ml、6ml、8ml、10ml、12ml 分别放入50ml容量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成 10、20、30、40、60、80、100、 120mg/L的系列标准溶液。 吸取上述系列标准溶液 0.1ml，分别放入刻度试管中，以 0.1ml蒸馏水代替标准溶 液作空白。再分别加入 0.4ml 5%水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置 20min后，再加 入8% NaOH溶液9.5ml，摇匀冷却至室温。显色液总体积为 10ml。 绘制标准曲线：以空白作参比，在 410 nm波长下测定光密度。以硝态氮浓度为横 坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。 2 ?样品中硝酸盐的测定 样品液的制备 取一定量的植物材料剪碎混匀， 用天平精确称取材料 2g左右，重 复三次，分别放入三支刻度试管中，各加入 10ml无离子水，用玻璃泡封口，置入沸水浴中 提取30min。到时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到 25ml容量瓶中，并反复冲洗 残渣，最后定容至刻度。 样品液的测定 吸取样品液0.1ml分别于三支刻度试管中， 然后加入5%水杨酸一 硫酸溶液0.4ml，混匀后置室温下 20min，再慢慢加入 9.5ml 8%NaOH溶液，待冷却至室温 后，以空白作参比，在 410nm波长下测其光密度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出 硝态氮浓度，再用以下公式计算其含量。 C V NO3—- N 含量=W 式中 C—标准曲线上查得或回归方程计算得 NO3— - N浓度； V —提取样品液总量； W —样品鲜重。 实验2 硝酸还原酶活性测定 硝酸还原酶是植物氮素代谢中的关键酶之一，它与作物吸收利用氮肥有关， 对作物的产量和品质有影响。因而可以把硝酸还原酶的活力当作植物营养或农田 施肥的指标之一，也可作为品种选育的指标之一。通过本实验可初步掌握测定硝 酸还原酶活性的原理与方法。 一、 原理 硝酸还原酶能将NO3—还原成NO2— 产生的NO2—的量与硝酸还原酶的活性相关。通过测定反应液中产生的 NO2— 含量，即可确定酶活性大小。 NO2—含量可用磺胺显色法测定。 NO2—与磺胺及a—萘胺在酸性条件下生成红 色偶氮化合物其反应如下： 酶活性可用单位鲜重组织在单位时间内产生的亚硝酸量来表示： 亚硝酸态氮微克数/克鲜重组织1小时。 二、 实验材料、仪器和试剂 1 ?实验材料 植物的根、茎、叶，本实验选用白萝卜叶片 2?仪器 分光光度计(2)离心机(3)真空泵和真空干燥器 恒温水浴锅(5)恒温箱(6)刻度吸管(Iml、2ml、5ml) 7)试管 (8)天平 (9)三角瓶(50ml) 3 .试剂 (1)亚硝酸钠标准液：称取 0.1000g亚硝酸钠(AR,用蒸馏水溶解并定容 至100ml。然后吸取5ml再用蒸馏水定客至 1000m1。即为浓度5卩g/