转录组学研究的方法.pptVIP

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2021-01-06 发布于福建
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转录组学研究的方法.ppt

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SITAS 转录组学基本研究方法陈军 chenjun@xmu.edu.cn 2011.5.10 上堂课内容 ·mRNA检测技术核酸杂交技术原位杂交逆转录PCR( Reverse transcription PCR, RT-PCR) 全长cDNA文库 Real-time Pcr 核酸杂交 (A) Denaturing Reannealing s conditions conditions (heat alkali) A Guc Denature: add RNA hybridizes 8 RNA(in large with one amounts compared DNA strand to dnA) northern blot AMI RNA tmpl l rel Pace pd on wit fe paper Bren nu sac HNA Tes ea hiter by arary ction EP可ue Aod esdiad study there probc DNA of inerest avnt Probe bytnduzes trnaS aove 探针制备 ·放射性同位素标记物 a-32P-dcTP 变性灵敏度达001pg Klenow大片段3 P- dNTP ·非放射性标记物地高辛随机引物标记法灵敏度达01pg DIG-dUTP--通过酶促反应掺入到 DNA/RNA中去制成探针--杂交--加抗地高辛-酶的复合物一加底物一显色探测不同条件下的基因表达变化二一三 z -z ≥三 Stromelysin-1 DA2003 原位杂交1 FISH: fluorescence Fluoresence In Situ Hybridization In Situ Hybridization Honda 原位杂交 LPI Serotonin tra E Glial ACh Binding Protein Achatin-like neuropeptide Pleurin LL,2006 BCIP/NBT HH,O,/DA 色沉淀染色系统色沉淀染色系统无色底物底物磷酸酶 )过氧化物霉抗地高辛抗体杭地高辛抗体地高辛半抗原地高辛学抗原连接臂连接臂地高辛标记探针地高辛标记探针靶DNA序列把DNA序列逆转录( Reverse transcription) ·逆转录酶:依赖于RNA的DNA聚 mRNa 3 TTTTTTTTTUIT 合酶。这种酶是1970年美国科学家特明(H. M. Temin)和巴尔的 Anneal primer 摩(D. Baltimore)分别于动物致癌 mRNA RNA病毒中发现,他们并因此获 A 得1975年度诺贝尔生理学或医 Reverse transcriptase 学奖 mRNA Alkali I dIlI CDNA