SrDNADGGE关键技术基本路线.docVIP

16SrDNA-DGGE技术基础路线 一 样品总DNA提取 1 试验器材：玻璃器材，铝盖，1.5mL离心管，螺口管，锆珠，搅拌器，4℃ 2 试验试剂：PBS（0.05M，pH=7），水饱和酚，TE饱和酚，TN150，TE缓冲液，TAE缓冲液，NaAc (pH=5.2),氯仿/异戊醇（24：1）（V/V），96%冷乙醇，70%冷乙醇。 3 试验操作： 3.1 细胞分裂 称取0.5g样品入含0.3g锆珠、已灭菌screw-capped tube 中， 加入1mL TN150，和150μＬ 酸性酚，bead-beater匀浆（5000rpm,3min）,冰上冷却， 加入150μＬ氯仿/异戊醇，涡旋混匀， 10000rpm离心，5min 转移上清液至已灭菌eppendorf管 3.2 DNA提取 加入150μＬ氯仿/异戊醇，和150μＬTE饱和酚至上述eppendorf管中 涡旋混匀1min， 10000rpm离心1min， 上清移入灭菌eppendorf管中， 反复上述步骤直至水相之间界面清楚为止， 上清移入灭菌eppendorf管中， 加入300μＬ氯仿/异戊醇，10000rpm离心1min， 上清移入灭菌eppendorf管中， 加入96%冷乙醇1mL，和50μＬ3M NaAc (pH=5.2), -20℃ 10000rpm离心20min 弃上清， 加入500μＬ70%冷乙