四种提取土壤dna的方法.docxVIP

OMEGA试剂盒法 1称取500mg玻璃珠于15ml离心管中，加入 0.2-0.5g土壤样品。加1ml Buffer SLX Mlus，以最大转速涡旋震荡3-5min，以溶解土样。 2.加入100dBuffer DS，震荡混匀。 3.70°C水浴10mi n,水浴过程中，轻轻震荡。 于室温离心（3000rpm） 3min，上清吸取 800 d至2ml离心管，加入 270 d Buffer SP2,充分震荡混匀。 冰浴 5min, 4°C、12000rpm离心 5min。 小心将上清移至新的 2ml离心管中，加入0.7倍体积异丙醇，反复颠倒混匀 （轻轻地20-30次），于室温放置30min。 7.4°C、12000rpm离心 10min,以沉淀 DNA。 8.弃上清，确保不将 DNA团块倒掉，将管口至于卫生纸上 1min，以流干液 体。 9加入200 dElution Buffer于管内，轻轻震荡10s。 10加入 50-100 dHTR Reage nt ,轻轻震荡 10S。 室温放置 2min，12000rpm离心 2min。 将上清移至新的离心管中，加入等体积 XP2 Buffer，轻轻震荡混匀。 将上一步中的样品转移到插有柱子的收集管中， 10000rpm室温离心1min, 弃上清。 14加入 300 d XP2 Buffer， 10000rpm离心 2min,弃收集管。 将柱子插入新的收集管，加入 700 d SPW Wash Buffer （提前用无水乙醇配 好），10000rpm离心1min，弃上清。 重复上一步。 弃液体，12000rpm室温离心2min。 将柱子插入新的离心管中，加入 30-50 d Elution Buffer于柱子中央，65°C水 浴 10-15mi n。 19.12000rpm离心1min,洗脱DNA，洗脱液保留。 20.重复步骤18、19。 周法 1.称取5g 土壤样品于50ml离心管中，加入13.5ml提取缓冲液（2% CTAB提取 液pH8.0）和50 d蛋白酶K （20mg/ml），置于37°C恒温摇床上（水平放 置），150-180rpm 摇 1h。 2加入1.5ml 20% SDS,轻轻混匀，65°C水浴45min，每隔20min轻轻摇动一 次，混匀泥浆。 3.6000rpm常温离心10mi n,将上清液转移至新的 50ml离心管中。 注：转移上清时，动作要慢、轻 加入等体积酚：氯仿：异戊醇（ 25 : 24 : 1），轻轻颠倒 2-3min混匀， 12000rpm、低温（4°C ）离心10min,将上清轻轻转移至新的 50ml离心管。 向上清中加入等体积的异丙醇，轻轻混匀，室温放置 1h。 6低温、12000rpm离心15min，弃上清，倒置卫生纸上。 7加入300-500 d70%乙醇洗涤，盖紧盖子，轻轻转动离心管， 12000rpm离心 3min。 8.吸干乙醇，37°C烘干。 9加入200-300 1TE，所得溶液即为DNA粗提液。 改良CTAB法 取2g样品置于50ml离心管中，加入5ml 2XCTAB抽屉缓冲液。 放入液氮中速冻30S，立即取出65°C水浴30S，如此反复3次。 加入1/ 3体积的玻璃珠，高速震荡3mi n. 置于65°C水浴20min,每隔10min轻轻摇匀一次。 加入等体积酚：氯仿：异戊醇( 25 : 24 : 1)，轻轻颠倒 2-3min混匀， 12000rpm、低温(4°C )离心10min,将上清轻轻转移至新的 50ml离心管。 以下步骤同周法5-9。 SDS-CTAB-溶菌酶法 1.取5g样品置于 50ml离心管中，加入 12ml抽提液(100mM Tris-HCl、 100mMNa2EDTA、 100mMNa2HP04、1.5M NaCl )，再加入 500 山 溶菌酶 (50mg/ml)，于 37oC 震荡 30min。 2加入7 pl蛋白酶K ( 20mg/ml )和1.5ml 2%CTAB轻轻混匀。 3加入 1.5ml 20%SDS，65°C 水浴 45min,每隔 20min摇匀一次。 以下步骤同周法4-9