Arctigen对LPS诱导的神经炎症和认知障碍的保护作用及机制研究.pdfVIP

摘要 摘要 研究表明，牛蒡子苷元 （arctigen, ARG）在人体内具有很强的抗炎作 用 。本研究通过构建神经炎症动物模型，旨在探讨ARG对脂多糖 lipopolysaccharide LPS （ ， ）诱导的神经炎症、神经生物学改变及认知功 能障碍的保护作用及其可能机制。 C57BL/6J 22±2g Control 方法 雄性小鼠（体重 ）随机分为野生对照（ ） 组，模型组（LPS，250μg/kg/d），牛蒡子苷元治疗组（ARG，100mg/kg/d）， ARG 100mg/kg/d LPS 250μg/kg/d 治疗药物单用组 （ ， ）。连续腹腔注射 （ ） 7天构建神经炎症动物模型，溶解于0.5%羧甲基纤维素的ARG在腹腔注射 LPS前两周按剂量进行灌胃治疗，持续3周。Control组腹腔注射相同容量的 0.9%无菌生理盐水和灌胃0.5%羧甲基纤维素钠作为对照。治疗结束后，通过 Morris水迷宫检测实验动物认知能力。尼 氏 （Nissl）染色结合海马组 织凋亡相关分子Caspese3和PARP1的表达检测海马神经元损伤；硫磺素S Thioflavine-S Aβ Aβ （ ）染色结合免疫荧光染色检测 二聚体以及 表达，进一 APP BACE1 Aβ SYP 步通过免疫印迹检测 、 的表达分析 的生成；免疫荧光 和 PSD95共染检测突触密度；免疫组化检测海马组织CA1、CA3和DG亚区 域神经炎症小胶质细胞和星形胶质细胞的激活，免疫印迹检测小胶质细 胞标志物IBA1和星形胶质细胞标志物GFAP的表达，通过ELISA分析脑组 织炎症因子TNF-α、IL-6以及IL-1β的含量；免疫印迹检测TLR4/ CD14/ NF-кB信号的表达。同时我们用LPS作用的脑特异性巨噬细胞BV2细胞系 诱导神经炎症反应，用CCK8法检测细胞活性，筛选合适的ARG给药浓 度，用ELISA法检测不同浓度的ARG对 BV-2细胞释放炎症因子TNF-α、 IL-1β IL-6 TLR4/CD14/NF-кB 、 的影响，进一步通过免疫荧光检测 信号的激 活，研究ARG的抗炎以及神经保护作用。 结果 Morris水迷宫平台隐藏实验结果显示，与Control组相比，LPS 模型组小鼠寻找隐藏平台的潜伏期显著延长；而与模型组小鼠相比，ARG p 0.05 治疗组小鼠寻找隐藏平台的潜伏期显著缩短 （均 ＜ ）。空间探索 实验结果中，与Control组相比，LPS模型组小鼠在 目标象限停留时间 减少了31.4%；与模型组小鼠相比，ARG治疗组小鼠在 目标象限停留时 间增加了30.7%。Nissl染色结果显示，与Control组相比，LPS模型组小 鼠海马组织CA1、CA3和DG亚区域尼氏小体分别降低41.5%、56.5%、 58.4% ARG CA1 CA3 DG ；与模型组小鼠相比， 治疗组小鼠海马组织 、 和