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地黄连作障碍发生的生物机制及其消减措施研究 目 录 摘 要i ABSTRACTiii 缩略语表vi 1 前言1 1.1研究问题的由来2 1.2化感作用与连作障碍3 1.2.1化感自毒作用的定义3 1.2.2化感自毒作用与连作障碍形成4 1.3地黄连作障碍研究进展5 1.3.1地黄化感自毒物质筛选鉴定6 1.3.2化感自毒物质介导的连作地黄根际灾变机制7 1.3.3连作胁迫对地黄的生理响应及其伤害机制10 1.3.4地黄的免疫系统与其连作障碍14 1.3.5地黄连作障碍的消减策略与防治技术15 1.4研究的目的和意义19 2 材料与方法22 2.1 供试材料22 2.2 病原菌的分离与鉴定22 2.2.1 病原菌的分离纯化22 2.2.2 病原菌菌落形态观察22 2.2.3 病原菌分子生物学鉴定22 2.2.4 ITS区序列系统发育树构建及分析23 2.2.5 病原菌的致病性分析23 2.3 外源添加微生物菌剂实验23 2.3.1 拮抗菌的分离与鉴定23 2.3.2 菌剂的发酵制作24 I 华中农业大学2020届博士研究生学位论文 2.3.3 大田实验25 2.3.4 地黄生物量测定25 2.3.5 地黄品质测定25 2.3.6 地黄土壤理化性质测定26 2.3.7 地黄土壤生物学性状测定26 2.3.8 地黄根际土壤微生物群落结构高通量测序检测27 2.4 土壤强还原实验27 2.4.1 大田实验27 2.4.2 地黄生理生态指标分析28 2.4.3 地黄品质测定28 2.4.4 地黄土壤理化性质测定28 2.5 数据处理28 3 结果与分析29 3.1连作地的地黄病原菌的分离、鉴定29 3.1.1病原菌的分离和初步鉴定29 3.1.2病原菌分子生物学检测结果31 3.1.3 ITS区基因系统发育分析31 3.1.4 病原菌的回接32 3.2尖孢镰刀菌拮抗菌的筛选、分离与鉴定34 3.2.1拮抗菌的分离与筛选34 3.2.2尖孢镰刀菌拮抗菌的鉴定34 3.3 特基拉芽孢杆菌对地黄连作障碍的影响36 3.3.1 菌剂对地黄生物量和产量的影响36 3.3.2 菌剂对地黄品质指标的影响40 3.3.3 菌剂对土壤养分状况的影响41 3.3.4 菌剂对土壤生物学性状的影响43 3.3.5 菌剂对根际微生物群落结构的影响48 3.4 土壤强还原处理对地黄连作障碍的影响51 II 地黄连作障碍发生的生物机制及其消减措施研究 3.4.1 土壤强还原处理对地黄生长及存活率的影响51 3.4.2 土壤强还原处理对土壤理化性质的影响52 3.4.3 土壤强还原处理对地黄产量和品质的影响53 4 结论与讨论55 4.1 结论55 4