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粪类圆线虫中40S pre-rRNA 成熟关键因子 （RIOK-1，RIOK-2 和DIM1）编码基因的功能研究
目 录
中文摘要i
Abstractiii
缩略语表v
1. 文献综述1
1.1 核糖体加工过程介绍及功能1
1.1.1 核糖体加工过程介绍1
1.1.2 与核糖体40Spre-rRNA 结合的七个装配因子及功能3
1.1.3 与核糖体40Spre-rRNA 结合的七个装配因子之间的相互作用5
1.2RIOK 蛋白激酶7
1.2.1 蛋白激酶介绍7
1.2.2RIOK 蛋白激酶家族8
1.2.3RIOK-1蛋白激酶的功能研究9
1.2.4RIOK-2 蛋白激酶的功能研究10
1.3DIM1 甲基转移酶介绍13
1.3.1 甲基转移酶13
1.3.2DIM1 甲基转移酶的功能研究14
1.4 粪类圆线虫及其引起的疾病介绍15
1.4.1 粪类圆线虫生活史15
1.4.2 粪类圆线虫病的临床症状和诊断治疗方法16
1.5 显微注射转基因技术的介绍和应用17
1.5.1 显微注射技术及应用17
1.5.2 显微注射技术在秀丽新杆线虫中的应用18
1.5.3 显微注射技术在粪类圆线虫中的应用19
2. 研究目的与意义21
3. 材料与方法22
3.1 实验材料22
3.1.1 实验动物及试验用虫株22
3.1.2 试验用菌株及载体22
3.1.3 主要仪器与设备22
3.1.4 主要试剂22
3.2 试验溶液的配制23
3.2.1 抗生素和细菌培养基23
3.2.2 蛋白表达纯化23
I
华中农业大学2020 届博士研究生学位 （毕业）论文
3.2.3 琼脂糖凝胶电泳缓冲液24
3.2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)缓冲液24
3.2.5 其他试剂的配制24
3.3 实验方法25
3.3.1 实验动物感染模型的建立25
3.3.2 粪类圆线虫虫体的收集及保存25
3.3.3 粪类圆线虫 DNA 的提取26
3.3.4 粪类圆线虫 RNA 的提取及cDNA 的合成27
3.3.5 基因克隆基本实验技术28
3.3.6 粪类圆线虫Ss-riok-1基因功能研究相关实验方法32
3.3.7 粪类圆线虫Ss-riok-2 基因功能研究相关实验方法32
3.3.8 粪类圆线虫Ss-dim-1基因功能研究相关实验方法37
4. 结果与分析41
4.1 粪类圆线虫Ss-RIOK-1对幼虫生长发育的影响 41
4.1.1D282A 突变型Ss-RIOK-1的表达引起转基因幼虫的生长发育延缓41
4.1.2D282A 突变型Ss-RIOK-1的表达引起转基因幼虫的死亡41
4.1.3 野生型Ss-RIOK-1的共表达可有效救援D282A 突变表型43
4.2 粪类圆线虫Ss-RIOK-2 对幼虫生长发育和虫卵孵化的影响44
4.2.1 突变型Ss-RIOK-2 的体外激酶活性检测44
4.2.2 野生型和D228A 突变型Ss-RIOK-2 在幼虫体内的表达谱48
4.2.3 在皮下表达Ss-RIOK-2 的幼虫数量随幼虫的生长发育而增加51
4.2.4 催化区关键氨基酸位点突变型Ss-RIOK-2 延缓幼虫的生长发育51
4.2.5Ss-RIOK-2 在虫卵中细胞
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