实验一蛋白质含量的测定.docxVIP

〔Ⅱ〕 实验部分 实验一 蛋白质含量测定法 本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。 了解各种测定方法的基本原理和 优缺点。 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用 的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（ Biuret 法）、Folin －酚试剂法（ Lowry 法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝 法（ Bradford 法）。其中 Bradford 法和 Lowry 法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏 10～ 20 倍，比 Biuret 法灵敏 100 倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。 值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。 考马斯亮蓝法（ Bradford 法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。 一、微量凯氏（ Kjeldahl ）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化） ，氨又与硫酸作用，变成硫 酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中