12生物化学实验--核酸的定量分析.docxVIP

核酸的定量分析 【 目的 】 1 ．掌握定糖法、定磷法和紫外吸收法分别定量分析  DNA 或 RNA 的方法。 2 ．熟悉定糖法、定磷法和紫外吸收法分别定量分析 DNA 或 RNA 的原理。 【 原理 】 核酸分子中含有戊糖、磷酸与含氮碱，测定三者之一即可推算出核酸含量。 1 ．定糖法 通过测定 DNA 或 RNA 分子中戊糖的含量，从而计算出 DNA 或 RNA 含量的方 法。 RNA在强酸环境中加热可水解产生核糖。 核糖在浓酸作用下脱水形成糠醛， 糠醛 能与 3 ， 5 - 二羟基甲苯（地衣酚）缩合成绿色化合物（反应式见第 3 篇实 验 11 ），其最大吸收峰波长为 670nm ， fe 3+ 或 Cu 2+ 可作为催化剂催化 反应，与同样处理的核糖标准液进行比色即可测定出 RNA 的含量。 DNA在强酸环境中加热水解生成的脱氧核糖与浓酸共热脱水生成 ω - 羟基 γ - 酮基戊醛，后者与能与二苯胺反应生成蓝色化合物（反应式见实验 11 ），其最 大吸收峰波长为 595nm ，与同样处理的脱氧核糖标准液进行比色即可测定出DNA的含量。 2 ．定磷法 通过测定核酸中磷的含量，从而计算出 DNA 或 RNA 含量的方法。 核酸含磷量平均为 8.73% （ RNA 含磷量为 8.5~9% ； DNA 含磷量为 9.2