GFP的简介和应用.pptxVIP

GFP 的简介和应用 GFP的简介和应用 【摘要】源于多管水母属等海洋无脊椎动物的绿色荧光蛋白（GFP），是一种极具应用潜 力的标记物，有着极其广泛的应用前景。本文就GFP的理化性质、荧光特性、改进以及它 在科学研究中发挥的作用进行了综述。 【关键词】绿色荧光蛋白（GFP）、标记物、荧光特性、进展、改进、应用、干细胞移植 【正文】 一、GFP的简介 GFP的理化性质，荧光特性及其改进 GFP的理化性质 从水母体内分离到的GFP基因，长达2.6kD，由3个外显子组成，分别编码69、98和71个氨 基酸。GFP本身是一种酸性，球状，可溶性天然荧光蛋白。AequoriaGFP分子量约27×103， 一级结构为一个由238个氨基酸残基组成的单链多肽；而RenillaGFP是分子量为54kD的同 型二聚体。两种GFP有不同的激发光谱，AequoriaGFP在395nm具有最高光吸收峰，肩峰 为473nm；RenillaGFP在498nm具有强烈的光吸收，肩峰为470nm。两种GFP含有相同的 生色团，发射光谱基本相同（λmax=508~509nm）。 GFP性质极其稳定，易耐受高温处理，甲醛固定和石蜡包埋不影响其荧光性质。其变性 需在90℃或pH4.0或pH12.0的条件下用6mol/L盐酸胍处理，一旦恢复中性环境，或去除 变性剂，虽然变性的蛋白质并不能完全复性，但是复性蛋白质同天然蛋白质对温度、pH变 化的耐受性、抗胰蛋白酶消解的能力是相同的。更重要的是，它们在很大的pH范围内的吸 收、发射光谱也是相同的。RenillaGFP的稳定性就更为显著。它在上述一系列的变性条件 下都很稳定，不易变性。根据Sheen等的研究，GFP在受体内表达时，其稳定性并不亚于 CAT蛋白，因而可以得到持续时间较长的荧光。 GFP的荧光原理 GFP的性质和发射光谱的稳定性是同其生色团结构的稳定性密不可分的。GFP表达后折叠， 在氧存在的条件下，使66位氨基酸残基的α、β键间脱氢。由65~67位的氨基酸残基 （Ser-Tyr–Gly）环化为稳定的对羟基苯咪唑啉酮（4-p-hydroxybene-5-imidazolinone）， 形成生色团（基于组成生色团的元件不同，可将已知的GFP及其变种分为7种，每一种都有 一组不同的荧光激发和发射波长)。GFP无需再加任何底物和辅助因子，在紫外或蓝光激发 下就能发荧光，在450~490nm蓝光激发??，GFP荧光至少能保持10min以上，不像其他荧;GFP 的简介和应用;2.2作为生物传感器;4;5;6