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丁酸梭菌CB1 通过TLR2/4-NF-κB 上调IPI-2I 细胞FcRn 表达的研究 目 录 摘 要 i Abstract iii 缩略语表（Abbreviation ）vi 第一章 文献综述 1 1.1 IgG 在黏膜免疫中的作用 1 1.2 益生菌 1 1.2.1 益生菌与肠道黏膜免疫 1 1.2.2 益生菌的作用机制 2 1.2.3 益生菌的抗病毒作用 2 1.3 FcRn 3 1.3.1 FcRn 的表达与分布 3 1.3.2 FcRn 的结构 4 1.3.3 FcRn 的功能及其应用 4 1.4 模式识别分子 5 1.5TLR 6 1.5.1 TLR 的结构及识别PAMP 6 1.5.2 TLRs 的信号转导 7 1.6 NF-κB 家族成员 8 1.7 NF-κB 的激活与终止 9 1.8 研究目的与意义 10 第二章 体外试验筛选调控FcRn 表达的益生菌 11 1 引言 11 2 材料与方法 11 2.1 实验材料 11 2.1.1 细胞、菌株和质粒 11 2. 1.2 主要试剂 11 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位（毕业）论文 2.1.3 实验仪器 12 2.1.4 主要抗生素与培养基的配制 12 2.1.5 主要试剂的配制 13 2.2 实验方法 14 2.2.1 细胞复苏和培养 14 2.2.2 细菌培养和处理 15 2.2.3 MTT 法检测热灭活菌体对IPI-2I 细胞的毒性作用 15 2.2.4 热灭活菌体对IPI-2I 细胞FcRn 的表达调控 15 2.2.5 RT-PCR 方法测定FcRn mRNA 相对表达量 16 2.2.6 Western-blot 检测FcRn 蛋白水平的表达 18 2.2.7 DH5α 感受态细胞制备(氯化钙法) 19 2.2.8 质粒的转化及提取 19 2.2.9 质粒转染 19 2.2.10 双荧光素酶试验检测方法 20 2.2.11 统计学方法 20 3 结果与分析 21 3.1 热灭活菌体的细胞毒性试验 21 3.2 热灭活菌体对IPI-2I 细胞FcRn mRNA 的表达影响 21 3.3 Western blot 检测EFR026 和CB1 对IPI-2I 细胞FcRn 蛋白的表达变化 22 3.4 双荧光素酶报告实验 23 第三章 丁酸梭菌CB1 调控IPI-2I 细胞FcRn 表达的分子机制研究 27 1 引言 27 2 材料与方法 27 2.1 实验材料 27 2.1.1 主要试剂 27 2.1.2 抗体及Western blot 所需实验材料 28 2.1.3 细胞转染相关材料 28 2.2 实验方法 28 2.2.1 IPI-2I 细胞总RNA 的提取及反转录 28 II 丁酸梭菌CB1 通过TLR2/4-NF-κB 上调IPI-2I 细胞FcRn 表达的研究 2.2.2 荧光定量 RT-PCR 检测相关基因mRNA 水平 28 2.2.3 去内毒素质粒提取（小提） 29 2.2.4