蛋白质翻译后修饰组学技术.pdfVIP

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2021-01-13 发布于湖北
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蛋白质翻译后修饰组学技术.pdf

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蛋白质组数据分析与功能注释 Outline 1.Protein identification analysis 2. Protein quantification analysis 3. Functional data annotation 2 Outline 1.Protein identification analysis 2. Protein quantification analysis 3. Functional data annotation 3 Protein Identification Strategy Digestion Protein Peptides MS Analysis 1. Peptide mass fingerprinting, PMF (肽质量指纹谱）（MALDI-TOF-MS) 单个蛋白质的鉴定 2. MS+MS/MS tandem mass (一级质谱结合串联质谱）（ESI-LC-MS/MS) 复杂蛋白质混合物的鉴定 Protein ID MS spectrum interpretation • Database searching • De novo sequencing • Spectral matching 4 Proteases for digestion 用于质谱检测肽段的蛋白酶需要具备的特点：  酶的水解位点具有专一性  酶切产生的肽段大小应适合质谱分析并利于数据库检索（MW=700-5000 Da ）  酶自身稳定，不易降解 5 1. PMF: Single Stage MS MALDI-TOF-MS 6 Identification of proteins by PMF Limitations: Advantages:  Usually better coverage  Only for purified protein from 2D gel spot or  Very Fast HPLC fraction  Easy  No protein PTM information 7 2. Tandem MS （MS/MS ） Precursor mass, charge state Fragmentation spectrum (fragment ions)