MTT增殖实验（细胞水平）.pdfVIP

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2021-01-13 发布于安徽
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MTT增殖实验（细胞水平）.pdf

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解螺旋陪伴医生科研成长 MTT 增殖实验 1．实验原理 MTT 全称为3- (4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，是一种黄颜色的染料。活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶能够代谢还原MTT，同时在细胞色素C 的作用下，生成蓝色（或蓝紫色）不溶于水的甲臜（Formazan），甲臜的多少可以用酶标仪在 570nm 处进行测定。在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，因此可根据光密度 OD 值来推测出活细胞的数目。由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入MTT 不会有反应。解螺旋/ 2．实验目的通过该实验检测细胞生长状况。 3. 实验材料 3.1. 主要试剂试剂名称来源 Cat.No. 血清 BI 04-001-1A 双抗 Hyclone SV30010 胰蛋白酶 Hyclone SH30042 DMSO Sigma D2650 MTT Sigma M2128 异丙醇国药集团化学试剂有限公司 3.2 主要仪器仪器名称来源型号生物安全柜苏净安泰 BSC-B000IIA2 二氧化碳培养箱 Thermo 311 离心机上海卢湘仪公司 TP25-ws 1 解螺旋陪伴医生科研成长显微镜 Olympus CKX41 酶标仪 Epoch 波长595 nm 3.3 试剂配制 3.3.1 完全培养基配制于基础培养基中，加入10%FBS,1%双抗，以及其他培养成分（个别细胞需要额外的营养因子，请查看细胞库列表），轻轻混匀，4℃冰箱储存（以下简称培养基）。 3.3.2 D-Hanks 配制成分终浓度 NaCl 8 g/L KCl 0.4 g/L Na2HPO4·7H2O 0.1 g/L KH2PO4 0.06 g/L NaHCO3 0.35 g/L Glucose 1 g/L