- 1、本文档共3页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
解螺旋 陪伴医生科研成长
II 型胶原诱导性DBA/1 小鼠关节炎模型
1. 实验原理
胶原诱导性关节炎 (collagen induced arthritis,CIA)动物模型,是由Trentham 等
于 1977 年最先创建的实验性关节炎模型。研究发现约 50%的类风湿关节炎(Rheumatoid
arthritis,RA)患者血液中存在抗Ⅱ型胶原的自身抗体,提示Ⅱ型胶原可能诱导RA 的产生。
Ⅱ型胶原大量存在于关节软骨中,用异源性Ⅱ型胶原免疫动物,可诱导体内产生针对关节软
骨中的Ⅱ型胶原的自身免疫反应,建立胶原诱导性关节炎模型。目前已建立大鼠、小鼠CIA
模型。CIA 模型中CD4+T 细胞起着主要调节因素,而抗胶原蛋白Ⅱ型自身抗体、炎性细胞因
子等体液免疫因素也在其病理过程中起到重要作用。CIA 是目前国际上公认的RA 相关研究
的最佳动物模型。CIA 模型可用于类风湿性关节炎的发病机制、自身免疫病理调节、细胞因
子作用的研究以及类风湿性关节炎药物的药效学研究。DBA/1 小鼠对CIA 易感性较高,目前
常使用其建立CIA 模型。解螺旋/
2. 实验目的
建立类风湿关节炎相关的实验动物模型,对RA 进行研究。
3. 实验材料
3.1. 主要试剂
试剂 来源 Cat.No.
牛Ⅱ型胶原(冻干粉,10mg) Chondrex 20021
完全弗氏佐剂(1mg/ml) Chondrex 7008
不完全弗氏佐剂 Chondrex 7002
麻醉剂 动物房提供
冰醋酸 试剂科提供
1
解螺旋 陪伴医生科研成长
3.2. 主要仪器
仪器名称 来源 型号
电子计重台秤 德国 Sartorius LE225D
电动剃刀 飞科
1 ml 无菌注射器 BD 300841
3.3. 其他(请具体写明)
实验动物要求准备:SPF 级DBA/1 雄性小鼠,鼠龄6-8 周,体重20g±2g。
4. 实验步骤
(1) 造模前一天准备小鼠造模的试剂
Ⅱ型胶原:C Ⅱ溶于3.3 ml 0.1M 冰醋酸中,浓度3 mg/ml
(2) 初次免疫
1) 乳化胶原
乳化的过程中,3.3 ml 完全弗氏佐剂分三次加入到胶原中进行乳化,乳化的整个
操作过程都在冰上进行,最终乳化至胶原滴在水上没有油散开,形成水包油的
状态。解螺旋/
2) 造模
每只小鼠腹腔注射0.4 ml 麻醉剂 (或使用动物房的二氧化碳麻醉机),待小鼠麻醉
后用电动剃刀剔去尾根部被毛,在尾根部皮内注射100 µl 乳化胶原。
(3) 加强免疫
1) 在初次免疫21 天后进行第二次加强免疫,免疫前一天准备小鼠第二次免疫的麻醉
剂和胶原,Ⅱ型胶原:C Ⅱ溶于3.3 ml 0.1M 冰醋酸中,浓度3 mg/ml。
2) 乳化胶原
乳化的过程中,3.3 ml 不完全弗氏佐剂分三次加入到胶原中进行乳化,乳化的整
个操作过程都在冰上进行。最终乳化至胶原滴在水上没有油散开,形成水包油的状
态。
3) 造模
每只小鼠腹腔注射0.4 ml 麻醉剂,待小鼠麻醉后用电动剃刀剔去尾根部被毛,尾
根部皮内注射50µl 乳化胶原。
文档评论(0)