II型胶原诱导性DBA1小鼠关节炎模型.pdf

解螺旋 陪伴医生科研成长 II 型胶原诱导性DBA/1 小鼠关节炎模型 1. 实验原理 胶原诱导性关节炎 (collagen induced arthritis，CIA)动物模型，是由Trentham 等 于 1977 年最先创建的实验性关节炎模型。研究发现约 50%的类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）患者血液中存在抗Ⅱ型胶原的自身抗体，提示Ⅱ型胶原可能诱导RA 的产生。 Ⅱ型胶原大量存在于关节软骨中，用异源性Ⅱ型胶原免疫动物，可诱导体内产生针对关节软 骨中的Ⅱ型胶原的自身免疫反应，建立胶原诱导性关节炎模型。目前已建立大鼠、小鼠CIA 模型。CIA 模型中CD4+T 细胞起着主要调节因素，而抗胶原蛋白Ⅱ型自身抗体、炎性细胞因 子等体液免疫因素也在其病理过程中起到重要作用。CIA 是目前国际上公认的RA 相关研究 的最佳动物模型。CIA 模型可用于类风湿性关节炎的发病机制、自身免疫病理调节、细胞因 子作用的研究以及类风湿性关节炎药物的药效学研究。DBA/1 小鼠对CIA 易感性较高，目前 常使用其建立CIA 模型。解螺旋/ 2. 实验目的 建立类风湿关节炎相关的实验动物模型，对RA 进行研究。 3. 实验材料 3.1. 主要试剂 试剂 来源 Cat.No. 牛Ⅱ型胶原（冻干粉,10mg） Chondrex 20021 完全弗氏佐剂（1mg/ml） Chondrex 7008 不完全弗氏佐剂 Chondrex 7002 麻醉剂 动物房提供 冰醋酸 试剂科提供 1 解螺旋 陪伴医生科研成长 3.2. 主要仪器 仪器名称 来源 型号 电子计重台秤 德国 Sartorius LE225D 电动剃刀 飞科 1 ml 无菌注射器 BD 300841 3.3. 其他（请具体写明） 实验动物要求准备：SPF 级DBA/1 雄性小鼠，鼠龄6-8 周，体重20g±2g。 4. 实验步骤 (1) 造模前一天准备小鼠造模的试剂 Ⅱ型胶原：C Ⅱ溶于3.3 ml 0.1M 冰醋酸中，浓度3 mg/ml (2) 初次免疫 1) 乳化胶原 乳化的过程中，3.3 ml 完全弗氏佐剂分三次加入到胶原中进行乳化，乳化的整个 操作过程都在冰上进行，最终乳化至胶原滴在水上没有油散开，形成水包油的 状态。解螺旋/ 2) 造模 每只小鼠腹腔注射0.4 ml 麻醉剂 （或使用动物房的二氧化碳麻醉机），待小鼠麻醉 后用电动剃刀剔去尾根部被毛，在尾根部皮内注射100 µl 乳化胶原。 (3) 加强免疫 1) 在初次免疫21 天后进行第二次加强免疫，免疫前一天准备小鼠第二次免疫的麻醉 剂和胶原，Ⅱ型胶原：C Ⅱ溶于3.3 ml 0.1M 冰醋酸中，浓度3 mg/ml。 2) 乳化胶原 乳化的过程中，3.3 ml 不完全弗氏佐剂分三次加入到胶原中进行乳化，乳化的整 个操作过程都在冰上进行。最终乳化至胶原滴在水上没有油散开，形成水包油的状 态。 3) 造模 每只小鼠腹腔注射0.4 ml 麻醉剂，待小鼠麻醉后用电动剃刀剔去尾根部被毛，尾 根部皮内注射50µl 乳化胶原。