Transwell小室实验（细胞水平）.pdf

解螺旋 陪伴医生科研成长 Transwell 小室实验 1. 实验原理 Transwell 是一类有通透性的杯状的装置，放入培养板后，分为两室：Transwell 小室 内称上室，盛装上层培养液；培养板内称下室，盛装下层培养液。上下层培养液以聚碳酸酯 膜 （Polycarbonate Membrane）相隔。细胞种在上室内，因聚碳酸酯膜有通透性，故可研究 下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 Transwell 小室原理图 聚碳酸酯膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在含有低营养培养液的上 室里，下室放入高营养培养液，这样通过制造营养因子分布的差异，能给细胞一个由上室面 向下室面运动的动力，这样在培养箱中培养一定时间后，通过计数小室下室面的细胞数，就 能检测细胞的迁移能力。聚碳酸酯微孔膜（Polycarbonate Membrane），膜的孔径可为0.1-12 µm 不等。根据不同的实验目的及细胞的迁移能力，可以选择不同孔径的膜，用于检测肿瘤 迁移和侵袭能力的聚碳酸酯膜可选用5、8、12 µm 的孔径，常孔径为8µm。 若在细胞与聚碳酸酯膜间加入基质胶 （主要成分包括：层黏连蛋白、胶原IV 等，同时 含TGF- β成纤维细胞生长因子、组织纤维酶原活化因子以及其它在EHS 肿瘤中自然表达的 生长因子等）。基质胶覆盖住8 μM 的孔，防止非侵袭细胞穿透，侵袭性细胞通过分泌基质 金属蛋白酶等物质消化基质胶后穿孔，迁移到小室的下室面，这样便能模拟细胞分泌金属蛋 白酶消化细胞外基质，转移至其他组织的过程，从而检测细胞的侵袭能力。有侵袭能力的细 胞才可用于 Transwell 侵袭实验。建议实验前先用明胶酶谱法检测 MMPs 的表达，特别是 MMP-2 的表达。解螺旋/ 1 解螺旋 陪伴医生科研成长 2. 实验目的 检测肿瘤迁移、侵袭能力。 3. 实验材料 3.1. 主要试剂（试剂来源仅供参考） 试剂 来源 Cat.No. Matrigel RD Systems 3432-005-01 Transwell 板 Corning 3421 结晶紫 碧云天 甲醇 国药集团化学试剂有限公司 对于新手，不建议自己买matrigel 铺板 （对技术和经验要求比较高），可购买预铺有细胞 外基质的小室 （如BD BioCoat™ Matrigel™ Invasion Chamber，#354480） 3.2 主要仪器 仪器名称 来源 型号 生物安全柜 苏净安泰 BSC-B000IIA2 二氧化碳培养箱 Thermo 311 离心机 上海卢湘仪公司 TP25-ws 显微镜 Olympus CKX41 3.3 试剂配制 3.3.1 完全培养基配制 于基础培养基中，加入 10%FBS （视细胞的迁移能力，若比较弱，可增加血清浓度）， 1%双抗，以及其他培养成分（个别细胞需要额外的