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解螺旋 陪伴医生科研成长 western blotting 检测实验方法 1. 实验原理 蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即 Western Blot，它是分子生物学、生物化学和免疫遗 传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物 组织样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织 中表达情况的信息。[解螺旋 /]与 Southern 或 Northern 杂交方 法类似，但Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗 体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE 分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维 素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物 学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或 同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基 因表达的蛋白成分。 2. 实验目的 获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。 3. 实验材料 3.1. 主要试剂 （试剂来源仅供参考） 试剂 来源 Cat.No. RIPA 碧云天 P0013C PMSF Bio-Rad MSB1001 Pierce BCA Protein Assay Kit Thermo Scientific 23225 4X Leammli 加样缓冲液 Bio-Rad 1610747 β巯基乙醇 Sigma aldrich 60-24-2 Protein Marker 天能 180-6003 脱脂奶粉 生工 A600669 1 解螺旋 陪伴医生科研成长 Western Blot Stripping Buffer Thermo Scientific 21059 ECL Western Blotting Substrate Thermo Scientific 32106 解螺旋 / 3.2. 主要仪器 仪器名称 来源 型号 离心机 Thermo Scientific Micro17R 恒温金属浴 佑宁仪器 MiniH-100L 酶标仪 BioTek Epoch-256600 电泳仪 上海天能 EPS-300 凝胶成像系统 上海天能 Tanon-600 3.3. 其他（请具体写明） 蛋白 marker 需根据待检测蛋白分子的分子量选择合适的 marker。 4. 实验步骤 （简略版本） 1. 提取组织或细胞蛋白； 2. 测定蛋白质浓度 ；