各级医疗机构医院裂头绦虫幼虫检测.pdfVIP

WS/T 571 — 2017 各级医疗机构医院裂头绦虫幼虫检测 1 范围 本标准规定了裂头绦虫幼虫检测的操作流程。 本标准适用于各级疾病预防控制机构、 医疗机构和食品检测机构对鱼、 蛙和蛇中裂头绦虫幼虫的检 测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 18088 出入境动物检疫采样标准 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 裂头蚴 plerocercoid larvae 裂头绦虫的幼虫，是假叶目（ Pseudophyllidea ）、裂头科（ Diphyllobothriidae ）绦虫第三期幼 虫的总称（参见附录 A）。 3.2 阔节裂头蚴 plerocercoid larvae of Dibothriocephalus latus 或 phyllobothrium latum 寄生在鱼体内阔节裂头绦虫的第三期幼虫。 3.3 曼氏裂头蚴 plerocercoid larvae of Spirometra mansoni 寄生在蛙、蛇或人体内曼氏迭宫绦虫的第三期幼虫。 4 仪器器材 1 WS/T 571 — 2017 4.1 生物显微镜。 4.2 体视显微镜。 4.3 PCR 扩增仪。 4.4 电泳仪。 4.5 凝胶成像系统。 4.6 超净工作台。 4.7 高速离心机。 4.8 解剖用手术器械。 5 试剂材料 5.1 试剂 胃蛋白酶消化液； Tris- 乙酸电泳缓冲液（ TAE）；琼脂糖凝胶； 6 ×加样缓冲液； 100～2000 bp DNA 2 marker ；灭菌双蒸馏水 (ddH O) ； 70%乙醇（配制见附录 B 的 B.1 ）。 5.2 引物 扩增裂头蚴核糖体 DNA转录间隔区（ ITS ）引物序列；扩增裂头蚴细胞色素 C 氧化酶（ Cox1 ）引物序 列；阔节裂头蚴特异性引物序列及曼氏裂头蚴特异性引物序列（见附录 B 的 B.2 ）。 5.3 阳性对照 阳性对照为裂头绦虫相应基因片段的阳性克隆质粒或裂头蚴、裂头绦虫全基因组 DNA。 6 检测步骤 6.1 样品准备 6.1.1 样品种类：海鱼、淡水鱼、蛙和蛇。 6.1.2 样品采集：采样按照 GB/T 18088 执行。 6.2 样品检测 6.2.1 压片检查法 2 WS/T 571 — 2017 用手术剪对受检的鱼、蛙和蛇逐条 / 只进行解剖。取出内脏，将腹腔壁内膜刮下，观察腹腔内壁表 面，若有可疑白色点状物，用手术剪或手术刀分离皮肉， 用两把小镊子将肌肉撕开，取含有白色点状物 的组织用载玻片压片，用生物显微镜镜检判定结果。 6.2.2 蛋白酶消化法 称取样品 250 g 并剪成小块，按样品与胃蛋