题目答案-样品保存和相关设备-胡理怀.docxVIP

1真空冷冻干燥机注意事项 A: 1在进行干燥前，首先将样品物质进行简单处理，使样品形状，大小一致，松散平铺在金属盘上，或放在玻璃器皿和其他容器里，使厚度一致。 2 样品容器要放在金属板上，不要使容器互相叠压，要使容器与金属板不要有间隔。 3样品物质干燥完成时，样品室温度要升到（降到）室温，首先关闭真空泵与样品室，冷凝室之间的阀门，再关掉真空泵，慢慢地打开放气阀，切不可一下全打开，以免干燥样品被吹走。 2液氮罐安全使用的注意事项 A:1正常情况下，液氮贮存在密封式罐体时，要注意将液氮罐口保留一定缝隙，否则液氮气化时气体无法及时排出，极易造成爆炸事故。 2液氮是低温制品，在使用过程中要防止冻伤。 3在液氮中操作及存取冷冻物品时速度要快，注意轻拿轻放，以免物品解冻，造成不必要的损失。 4在使用和贮存液氮的房间内，要保持通风良好，以避免空间缺氧，造成人员窒息。 5由于液氮不具有杀菌性，故接触液氮的用具要注意消毒。 6液氮罐在运输过程中一定要固定好，以防震动和倒翻。 7液氮罐长期贮存物品时，要注意及时补充液氮。 3影响生物大分子样品保存的主要因素 A:⑴空气⑵温度⑶水份⑷光线⑸样品的pH⑹时间 4细胞非玻璃化冻存的方法 A: 利用各种温级的冰箱分阶段降温至-70～-80度，然后直接投入液氮进行保存；或者是利用电子降温仪以及利用液氮的气、液，按一定的降温速率从室温降至-100度以下，再直接投入液氮保存的方法。 冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16～18小时(或隔夜)---液氮槽长期储存。 5描述下菌种低温保存的几种方法 A: 真空冷冻干燥保藏法 是目前常用的较理想的一种方法。其基本原理是在较低温度下，（-18℃），快速地将细胞冻结，并且保持细胞完整，然后在真空中使水分升华。在这样的环境中，微生物的生长和代谢都暂时停止，不易发生变异。一般可保存5~10年左右 液氮超低温保藏法 液氮超低温保藏技术是将菌种保藏在-196℃的液态氮，或在-150℃的氮气中的长期保藏方法，它的原理是利用微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止而有效地保藏微生物。 是适用范围最广的微生物保藏法，其保存期最长。因为液氮的温度可达-196℃，远远低于菌种新陈代谢作用停止的温度（-130℃），故此时代谢活动已停止。保藏期一般为2~3年，长的可达9年之久。 -80℃低温冷冻保藏 将菌种保藏在-80℃冰箱中以减缓细胞的生理活动进行冷冻的一种保藏方法。 在最适宜的培养条件下将细胞培养至静止期或成熟期，进行纯度检查后，与保护剂混合均匀，分装（分装时应注意在无菌条件下操作) 。将安瓿管或塑料冻存管置于-80℃冰箱中保藏。 6DNA、RAN、蛋白质保存的异同 DNA保存 短期保存，加无菌水或TE缓冲液，4° 或－20° 。长期保存，刚提取好的DNA直接保存到乙醇里，放－20°或者-70° 。需要用的时候，再离心后，弃去乙醇，加水或TE溶解即可。DNA本来就是酸性，所以需要弱碱性环境保存，如果用中性或者酸性环境保存时间长容易降解。 RNA保存 保存RNA应该尽量低温。 若要长期保存,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。 为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。RNA即使是放在-80度下也会降解，所以最好的保存方法是将RNA逆转成cDNA后保存。提取的RNA保存在DEPC处理的水中，加入RNAse抑止剂，在-80度保存2个月，应该是可以保证不降解的。最好是反转录后保存。 蛋白质保存 蛋白溶液应避免极端的pH（强酸or强碱），同时也不能接近其等电点的pH。如果保存时间在24h以内，大多数蛋白可以放置到4℃。如果保存时间在24h以上，应该考虑避免蛋白溶液长菌，可以事先过滤一下或者加入抑菌的物质（如叠氮化钠）。在4度下顶多保存一周。在-20度最长保存一个月。如果打算保存数月之久，要加入一定量甘油，避免“冻伤”。最好的保存办法还是将蛋白样品冻干成粉末，放置-80度冰箱。冻干在大多数情况下可以很好地保存蛋白的活性，但不适于某些蛋白（因有些蛋白对冻干重溶时必然产生的盐离子浓度的急剧变化反应不佳，其活性会永久丧失 。）