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考马斯亮蓝法（Bradford）测蛋白浓度 考马斯亮兰法：一种蛋白定量法 具体操作步骤：（一）实验原理 双缩脲法（Biuret法）和Folin —酚试剂法（Lowry法）的明显缺点 和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋 白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几 种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏 度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最 大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，溶液的颜色也由 棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的 碱性氨基酸 （特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基 相结合。在595nm下测定的 吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。 Bradford法的突出优点是： （1） 灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量 可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大， 蛋白 质-染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变 化比Lowry法要大的多。 （2） 测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只 需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要 2分钟即 可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，