miRNA及其inhibitor转染方法.doc

v1.0 可编辑可修改 miRNA 及其 inhibitor 转染方法 1 对 mimics 、 mimics control 、inhibitor 、inhibitor control 进行稀释和分 装（终浓度为 100 nmol/ μ l ）。 1） Mimics 加入 250 μ l DEPC 处理的水； 2） Mimics control 加入 125 μl DEPC 处理的水； 3） inhibitor 加入 250 μ l DEPC 处理的水； 4） inhibitor control加入 125 μl DEPC 处理的水； 对以上进行分装： mimics 20 μl 每管，mimics control 10 μl 每管，inhibitor 20 μ l 每管， inhibitor control 10 μ l 每管。 分装后于－ 80 ℃保存。 2 经过调整，细胞状态较好。晚上铺细胞， 4 个 60 mm培养皿，每皿× 105 细胞。 做好标记，（1）为 mimics（ 2）为 mimics control （3）为 inhibitor （ 4）为 inhibitor control 。 上午八点对昨天晚上的细胞进行转染。 （ 1） a 用 500 μl opti-MEM 稀释 20 μ l mimics ，作用 5 min b 用 500 μl opti-MEM 稀释 20 μ l mimics control ，作用 5 min c 用 500 μl opti-MEM 稀释 20 μ l inhibitor ，作用 5 min d 用 500 μl opti-MEM 稀释 20 μ l inhibitor control ，作用 5 min （ 2） a 用 500 μl opti-MEM 稀释 10 μ l lip 2000 ，作用 5 min b 用 500 μl opti-MEM 稀释 10 μl lip 2000 ，作用 5 min c 用 500 μl opti-MEM 稀释 10 μ l lip 2000 ，作用 5 min d 用 500 μl opti-MEM 稀释 10 μ l lip 2000 ，作用 5 min （ 3）分别将（1）、（2）对应的 a、b、c、d 混合，轻轻吹打均匀后室温作用 20 min。 4）用无血清的 DMEM将培养皿中的细胞清晰干净，至少 2 次 5）向培养皿中加入 3 ml 无血清 DMEM 6）向培养皿中加入 a 和 b 的混合液（成点状均匀加入） 7）放入细胞培养箱作用 6 h 。 1 v1.0 可编辑可修改 下午三点对转染细胞进行换液： 弃去无血清 DMEM后每个 60 mm培养皿加入 4 ml 含 10%血清的 DMEM，18 h 后接毒。 2