黄曲霉素的检测方法.docx

食品中黄曲霉毒素的检测方法，现状及发展方向 食用油中黄曲霉毒素的分析检测方法 目前检测黄曲霉毒素的方法主要有薄层色谱法 (TLC) 、高效液相色谱法(HPLC)、以酶联免疫为基 础的免疫分析、免疫亲和分析法如微孔板酶联免疫吸附分析法 (EusA) 以及生物传感器法等。 薄层色谱法 (TLC) TLC 法是传统的检测 AFB 最常用方法，是应用 最早、最广的分离、分析技 术，曾是我国测定食品及 饲料中 AFB．的国家标准方法之一， 其原理是：样品 经提取、浓缩、薄层分离后，在 365 Bin 波长的紫外光 照射下，黄曲霉毒素 B】、B2 产生紫色荧光， G 、G2产 生绿色荧光，然后根据其在薄层板上显示的荧光 的 最低检出量来定量。其优点是：所用的试剂、设备简 单，费用低廉，容易 掌握，适用大量样品的分离、筛 选，一般的实验室均可开展，属于定性和半定 量的功 能。为了提高薄层层析法的精度，还建立薄层扫描 等其他的方法来确 定黄曲霉毒素，它是薄层层析法 的仪器化，样品的处理和层析条件与薄层层析 法相 同，只是在标准品的设定和结果判定上有所不同。 如卢艳杰等介绍了一 种简单、微型、低功率的光度检 测器用于定量薄层板上的 AFT，该装置简单、 便宜可 代替薄层扫描仪等其他测定 AFT含量的设备，最低 检测限可达 1 rig ， 符合欧洲对 AFT规定的限量。卢 艳杰等介绍了过压薄层色谱法 (OPLC)结合光度计， 成功地对多种食品中的黄曲霉毒素 B】、B2、G】和 G2 进行测定，同时该方法还适用于样品的提纯和分离， 一次可对十个样品进行分析，做到快速、有 效、低耗 地定量食品中 AFT[引。该法的局限性与不足之处 在于薄层色谱法检 测 AFT的操作步骤多，样品前处 理烦琐，并且提取和净化效果不够理想，提取 液中杂质较多， 因而在展开时影响斑点的荧光度， 导致灵 敏度下降。 灵敏度低、重现差、操作烦琐、时间长且 安全性差等缺点，已越来越不适用现代分析的要 求。 高效液相色谱法 (HPLC) 高效液相色谱法具有高效、快速、准确性好、灵 敏度高、重现性好、检测限低、定量准确的特点，可同时分离多种黄曲霉毒素，操作简便，适于大批量 样品的分析。倪梅林等 _6J 以 C18柱为固定相，以水 +异丙醇 +乙腈(80+12+8) 为流动相，用荧光检测器进行检测，其激发波长 365 Bin ，发射波长 450 nn3 ，样品用甲醇和水混合液进行萃取，随后进行衍生化处理，处理后溶解于流动相， 进行液相色谱测定。该法的最低检出限为 1．0 kg 。对浓度为 25 t~g ／ mL(相当于样品 5．0 g／ kg) 的样液进行 10 次检测， 测定精密度分别为： G1，l1 ．84％， B】，4．28％， G2，13． 41％， B2， 14．20％。李培武等介绍了利用 cI 键合硅石作为基质固相分散提取法 (MsPD)的吸附剂，以乙腈为洗脱剂， HPLC结合荧光检测器对花生中的四种 AFT进行测定，回收率为 78％～ 86％，相对标准偏差是4％一 7％，检测限范围达 0．125～ 2． 5 ng ／ g。高效液相色谱法是目前国内测定黄曲霉毒素使用最多、也是比较权威的方法，灵敏度高、精度高、能同时分 析多种黄曲霉毒素类型，但该法的样品前处理相对复杂，检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多、操作时需要专门的技术人员，难以满足现代检测快速、简捷、现场化的要求。 免疫分析法 免疫化学分析法 (Immunochemical Methods) 是以抗原抗体的免疫化学反应 为基础进行抗原抗体含量测定的方法。该法具有高度的特异性、灵敏性、快速简便、分析费用低、重现性好、短时间内能处理大量样品和易于普及等优点。 用于黄曲霉毒素测定的免疫分析法主要有酶联免疫吸附法 (EIJSA) 、放射免疫测定(RIA) 、流动注射免疫测定法 (n — IA) 等。 金标试纸法 金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法， 可一步式检测 AFT。一步式 AFT快速检测纸法可在 5—10 min 完成对样品中 AFB 的定性测定，具有简单、快速、灵敏度高等特点，无须仪器设备配合测定，检测既可在实验室中进 行，也可在农场、饲料混合车间等进行实地测定，对黄曲霉毒素定性检测准确 度在 85％以上，灵敏度为 4 ng／mL，可测出样品中 20 ng／g 的黄曲霉毒素 _1 。 Sun Xiu lan 等合成一种对 AFB 具有特异性的抗体金标探针，纳米金标探针用于免疫色谱法对 AFB 分析，完成一个样品分析所需要的时间少于 10 rnin ，比ELISA 少 6 10 min ，在标准品的对照下，最低检测限可达 2． 5 ng ／mL。 生物传感器