发酵过程控制技术 02-03谷氨酸棒杆菌斜面及平板划线培养 引导文-谷氨酸棒杆菌斜面及平板划线培养.doc

天津现代职业技术学院 PAGE 4 子情境：引导文 谷氨酸发酵过程控制-谷氨酸棒杆菌斜面及 平板划线培养 阅读材料 阅读材料 材料一：细菌的接种与分离技术简介 　　为了分离出细菌并进行准确鉴定，除选择好合适的培养基外，还要根据待检标本的来源、培养目的及所使用培养基的性状，采用不同的接种方法。 　　（一）平板划线分离法 　　在被检标本中，常混杂有多种细菌，平板划线分离法可使这多种细菌在培养基表面分散生长，各自形成菌落，以便根据菌落的形态及特征，挑选单个菌落进行纯培养。常用的平板划线分离法有以下两种： 　　1.连续划线分离法：此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许，于平板1/5处密集涂布，然后来回作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。 　　2.分区划线分离法：本法适用于杂菌量较多的标本。先将标本均匀涂布于平板表面边缘一小区（第一区）内，约占平板1/5面积，再在二、三、……区依次连续划线。每划完一个区，均将接种环灭菌一次。每一区的划线均接触上一区的接种线1、2次，使菌量逐渐减少，以获得单个菌落。 　　（二）斜面接种法 　　该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。用灭菌的接种环取单个菌落或少许细菌，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线。 　　（三）液体接种法 　　多用于一些液体生化试验管的接种。用灭菌接种环取菌少许，在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻研磨，使细菌混合于培养液中。 　　（四）穿刺接种法 　　此法主要用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。用接种针取细菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针沿原路退出医学教|育网搜集整理。 　　（五）倾注平板法 　　测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数时常用此方法。将标本经适当稀释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，倾入已溶化并冷却至45℃左右的定量培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。根据培养基内的菌落数和稀释倍数，即可计算出标本的细菌数。 　　（六）涂布接种法 　　常用于纸片法药物敏感性测定，也可用于被检标本中的细菌计数。加定量的被检菌液于琼脂平板表面，然后用灭菌的L型玻璃棒反复涂布几次，使被检物均匀分布在琼脂表面，然后贴上药敏纸片培养，或直接培养观察结果。 材料二：平板划线法 平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。通常认为这种单菌落就是某个微生物的“纯种”。 实际上由于同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，要获得可靠的纯种微生物，需进行多次划线分离。 操作：（1）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、接种 者姓名、日期等。 （2）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接种环移开火焰，待其冷却。 （3）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来的位置。 （4）分离划线接种细菌（四区接种法） ①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。 ②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板1/5），此视为二区。 ③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板1/4），此为三区。 ④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。 各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。 （5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放，送进37℃温箱培养。 （6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边缘、表面结构、透明度、颜色等性状。 材料三：斜面接种法