大鼠雷帕霉素靶蛋白(mtor)elisa试剂盒.docxVIP

大鼠雷帕霉素靶蛋白（mTOR）ELISA试剂盒 （用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 ） 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 mTOR单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 mTOR与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠 mTOR，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在 450nm处测OD值，mTOR 浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求岀标本中 mTOR浓度。 1.2.3.4.收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检 测，2-8 C保存48小时；更长时间须冷冻（-20 C或-70 C）保存，避免反复冻融。血清、血浆 至少作1 1. 2. 3. 4. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检 测，2-8 C保存48小时；更长时间须冷冻（-20 C或-70 C）保存，避免反复冻融。血清、血浆 至少作1 : 2稀释（取50ul，加标本稀释液50ul,稀释2倍）。细胞上清至少10倍稀释。 标准品液配制：使用前加入 1ml蒸馏水混匀，配成500ng/ml的溶液。设标准管8管，第一管加 标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液 500ul。在第一管中加入 500ng/ml的标准品 溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul 弃去。第八管为空白对照。 10 X标本稀释液用蒸馏水作 1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水） 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul，将反应板充分混匀后置 37 C 120分钟。 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6次，向滤纸上印干。 每孔中加入第一抗体工作液 100ul。将反应板充分混匀后置 37 C 60分钟。 洗板：同前。 每孔加酶标抗体工作液 100ul。将反应板置37 洗板：同前。 每孔加入底物工作液100ul，置37 C暗处反应 每孔加入100ul终止液混匀。 卫分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。 °C 30分钟。 15分钟。 1. 2. 1. 2. 3. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。 以标准品 50、25、12.5、6.25、3.12、 标纸上作图，画出标准曲线。 OD值在该曲线图上查出相应 1.56、 mTOR 0.78、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐 含量，再乘上稀释倍数。 灵敏度: 特异性: 重复性: 最小的mTOR检测浓度小于 可同时检测重组或天然的大鼠 板内、板见变异系数均小于 0.4ng/ml 。 mTOR。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。 12%。 酶标板(Coated Wells ) 96孔 酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate ） 12ml 10 x 标本稀释液(Sample Buffer ) 12ml 20 x浓缩洗涤液(Wash Buffer ) 50ml 标准品(Standards ) : 500ng/ 瓶 2瓶 底物工作液（TMB Solution ） 12ml 第一抗体工作液（Biotinylated Antibody 12ml 终止液(Stop Solution ) 12ml 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD值错误地升高 板条开封后剩余板条要再封好，保持 板条干燥。 本试剂盒宜置4°C冰箱保存。 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！ 想来生活，从来就不是阳春白雪的神话。光阴的陌上，总有风自八方来，或许是忧凄，也许是欢喜 想来生活，从来就不是阳春白雪的神话。光阴的陌上，总有风自八方来，或许是忧凄，也许是欢喜 ，无论怎样，都是岁月最真的馈赠。 懂我的你，是否也如我一样，遗忘了所有的言语。只是在掌心，一遍遍描摹一个人的名，那是切入骨髓的念，合着心脉的韵律，默默诉说一句话，让我们在这无边的春色里，相爱一场! 懂我的你，是否也如我一样，遗忘了所有的言语。只是在掌心，一遍遍描摹一个人的名，那是切入骨髓的念，合着心脉的韵律，默默诉说一句话，让我们在这无边的春色里，相爱一场! 待到老去的那一日，偶尔有回忆念及了过往，依旧还会有初初的心动，流转了眉眼。而那一路迤逦而来的美好，一步一步写就两个梅花小楷 一一日常。 暖阳小窗，无事此静坐。杯盏光阴，又在指间如风轻过，回首，依稀还是那年秋，低低一低眉，却已是春光葳蕤。 光阴荏苒，而流年从来也不曾缺少错乱和