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- 2021-01-23 发布于广东
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PBS 缓冲液配制0.01M 磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法称取 8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸馏水中,用 HCl 调节溶液的 pH 值至 7.4,最后加蒸馏水定容至 1L 即可。在 15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸 气灭菌(至少 20 分钟),保存存于室温或 4℃冰箱中。需要注意的是,通常所说的浓度 0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或 K 离子的浓度,Na 离子和 K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要 在配置的时候分别加入 100 u/ml 青霉素和链霉素之后再调 PH、定容、灭菌消毒。NaCl 8.0g ; KCl 0.2g ; Na2HPO4 1.44g ; KH2PO4 0.24g ;加蒸馏水 至 1000ml,调节 pH 到 7.4(用Na2HPO4 或 KH2PO4 调节) 。用于免疫反应时可加入 0.1%叠氮钠(0.1g/100ml PBS);当试剂中含有辣根过氧化物酶 时,严禁使用叠氮钠,可改用 0.01%柳硫汞。PBS 缓冲液配方PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4 2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10.20.30.4根据经验来看,新鲜配置的 PBS 搅匀后其 PH 值约在 7.2-7.4 之间,可是在温度的影响下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在经过昼夜的时间后,PH 值会明显改变(我亲自测过偏 酸)。所以做实验的同学可要注意了,PH 值可能会影响实验结果,甚至可能导致阴性。所以 务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的 PBS,如果发生偏酸或偏碱,注意重新换新液。PBS 缓冲液称取 NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g,溶于 900ml 双蒸水中, 用盐酸调 pH 值至 7.4,加水定容至 1L,常温保存备用。PBST 缓冲液取 300μl Tween-20 加入 PBS 100ml 中,混匀后即刻使用。现用现配。如果是把所有固体加大十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍稀释,那么,在刚配好浓缩液时, PH 在 6.5 左右,明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调,但是有更方便的方 法。十倍稀释以后,PH 自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试, 配好之后再测一次~PH8.0 的 PBS 配方详细1. NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH 值调节至 8.0,然后加入去离子水将溶液定容至 1 L。4. 高温高压灭菌后,室温保存。注意:上述 PBS Buffer 中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充 1 mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2。0.05mol/L PBS(磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution,PBS)的配制:甲液:0.05mol/L Na2HPO4 溶液 :称取磷酸氢二钠 9.465g 7.099g,加蒸 馏水至 1000ml ;乙液:0.05mol/L KH2P04 溶液: 称取磷酸二氢钾, 9.07g 6.803g,加蒸馏水至 1000m1。将甲乙液分装在棕色瓶内,于 4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得 所需 pH 的缓冲液,见下表:pH 甲液ml乙液mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制pH=6.8 的 PBS,可用甲、乙液各 50ml 混合即可。
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