DNA提取过程及原理.docxVIP

. DNA 提取过程及原理 一、实验原理 从细胞中分离得到的 DNA 是与蛋白质结合的 DNA ，其中还含有大量 RNA ，即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。 盐溶法是提取 DNA 的常规技术之一。在制备核酸时，通常是用研磨破坏细胞壁和细胞 膜，使核蛋白被释放出来。利用 DNA 不溶于 0.14mol/L 的 NaCl 溶液而 RNA 能溶于 0.14mol/L 的 NaCl 溶液这一性质可以将 DNA 核蛋白和 RNA 核蛋白从样品破碎细胞液中分开。 分离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等杂质除去。去除蛋白的方法有 3 种：① 用含 辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除 去变性蛋白质。用这种方法 处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA 则溶于上层水相，用两倍体积 95% 乙 醇溶液可将 DNA 钠盐沉淀出来。② 用 十二烷基硫酸钠 (SDS) 等去污剂使蛋白质变性，从 而使其与核酸分离，也可 从材料中直接提取出 DNA 。③ 用苯酚处理，然后离心分层，一 样可以将 DNA 与蛋白质分离开来。 这时 DNA 溶于上层水相， 蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的 95% 乙醇即可得到白色纤维状 DNA 沉淀。反复 使用上述 方法多次处理 DNA 核蛋白溶液， 就能将蛋白等杂质较彻底地除去， 得到较纯的 DNA