紫外分光光度法测定未知物(修订稿).docx

紫外分光光度法测定未知物（修订稿） 仪器 1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm） 2个 1.2容量瓶（100mL）: 10个；容量瓶（250mL） 1个 1.3吸量管（10mL、5mL）:各1支 1.4 移液管（20mL、25mL、50mL）:各 1 支 试剂 2.1标准溶液（1mg/mL）:维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲 分别配成 1mg/mL 的标准溶液，作为储备液。 2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。（其必为给出的五种物质之一） 实验操作 比色皿配套性检查 石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为 100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于 0.5%，可配成一套使用。 3.2未知物的定性分析 将五种标准储备液均稀释成 10ug/mL 的试液（配制方法由选手自定） 。以蒸 馏水为参比，于波长 200~350nm 范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所 得到的吸收曲线对照标准谱图， 确定被测物质的名称， 并依据吸收曲线确定测定 波长。 五种标准物质溶液的吸收曲线参考附图。 3.3 未知物定量分析 根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并 配制待测溶液 3 份，进行平行测定。 推荐方法 维生素 C 含量的测定：准确吸取 1mg/mL 的维生素 C 标准储备液 50.00mL,在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为 200ug/mL）。再分别准确移 取1、2、4、 8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、 8、12、16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶 中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。 由标准曲线上查得未知 液的浓度 3.3.2苯甲酸含量的测定：准确吸取 1mg/mL 的苯甲酸标准储备液 25.00mL， 在 250mL 容量瓶中定容（此溶液的浓度为 100 ug/mL ）。再分别准确移取 1、 2、 4、6、8、10mL 上述溶液，在 100mL 容量瓶中定容（浓度分别为 1、2、4、6、 8、10ug/mL）。准确移取lO.OOmL苯甲酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于 最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。由标准曲线上查得未知液的浓度。 3.3.3水杨酸含量的测定：准确吸取 1mg/mL的水杨酸标准储备液50.00mL, 在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200ug/mL）。再分别准确移取1、2、4、 6、 8、 10mL 上述溶液，在 100mL 容量瓶中定容，（浓度分别为 2、 4、 8、 12、 16、20 ug/mL）。准确移取20.00mL水杨酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于 最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。由标准曲线上查得未知液的浓度。 3.3.4山梨酸含量的测定 准确吸取1mg/mL的山梨酸标准储备液25.00mL，在250mL容量瓶中定容 （此溶液的浓度为100 ug/mL）。再分别准确移取1、2、3、4、5mL上述溶液， 在100mL容量瓶中定容（浓度分别为 1、2、3、4、5ug/mL）。准确移取5mL山 梨酸未知液，在 100mL 容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的 吸光度。由标准曲线上查得未知液的浓度。 3.3.5邻二氮菲含量的测定 准确吸取1mg/mL的邻二氮菲标准储备液 25.00mL，在250mL容量瓶中定 容（此溶液的浓度为100 ug/mL）。再分别准确移取1、2、3、4、5mL上述溶液， 在100mL容量瓶中定容（浓度分别为 1、2、3、4、5ug/mL）。准确移取5mL邻 二氮菲未知液，在 100mL 容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液 的吸光度。由标准曲线上查得未知液的浓度。 4、结果计算 根据未知液的稀释倍数，可求出样品溶液的浓度。 0.500 n 265.00 \ / \ / \ / / \ \ / \ / / \ / \ — ■ —. 0.450 J 里 0.250 - 0.200 - 0.400 n 0.350 - 0.300 - 0.150- 0.100- 0.050 - 0.000 - 200 210 220 290 310 330 350 270 280 波长(nm) 230 240 250 维C吸收曲线 水杨酸吸收曲线 波长(nm)  山梨酸吸收曲线 波长(nm) 2.20- 2.00- 1.80- 1.60- ■ 1.40- 1.20- 1.00- 0.80- 0.60 ? ■ 0.40- 0.20- ■ o.oo- 220 230 240 32*00 200 210 250 260 邻二氮菲吸收曲线 270 2