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第三章 色谱分析法导论 3.1 概述 3.2 色谱流出曲线 3.3 色谱法基本原理 3.4 色谱定性和定量分析 Chromatography 1906 年，俄国植物学家 茨维特 在分离植物叶子中的色素时，将叶 片的石油醚（饱和烃混合物）提取 液倒入一根装有 CaCO 3 粉末的竖直玻 璃管中，再加入纯的石油醚任其自 然流下，一会儿柱中出现不同颜色 的谱带，植物浸取液中的色素得到 了分离。 3-1 概述 色谱法的产生 ? 色谱法中包含两相 固定相 — 固定不动的相 CaCO 3 流动相 — 推动混合物流动的液体 石油醚 ? 色谱法 ： 一种重要的 分离 分析方法，混合物在流动 相的携带下通过色谱柱分离出几种组分的方法。 1 、按两相状态分类 气相色谱（ GC ） 液相色谱（ LC ） 超临界流体色谱（ SFC ） 气固色谱 GSC －固体吸附剂 气液色谱 GLC －液体 液固色谱 LSC －固体吸附剂 液液色谱 LLC －液体 2 、按操作形式分类 （ 1 ）柱色谱： 固定相装在柱管内的色谱法。 （ 2 ）纸色谱： 滤纸为固定相的色谱法，流动 相是含一定比例水的有机溶剂，样品在滤纸 上展开进行分离。 （ 3 ）薄层色谱： 把固体固定相压成或涂成薄 膜的色谱法。 3 、按分离原理分类 （ 1 ）吸附色谱： 利用吸附剂表面对被分离的各组分 吸附能力不同进行分离。 （ 2 ）分配色谱： 利用固定液对各组分的溶解能力不 同进行分离。 （ 3 ）离子交换色谱： 利用离子交换剂对各组分的亲 和力不同进行分离。 （ 4 ）凝胶色谱： 利用凝胶对分子的大小和形状不同 的组分所产生的阻碍作用不同而进行分离的色谱法。 § 3-2 色谱图及色谱常用术语 一、色谱图 1 、 基线 — 在实验操作条件下，色谱柱后没有 样品组分流出的曲线称为基线。稳定的基 线应该是 一条水平直线 。 2 、 峰高 — 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离， 以（ h ）表示。峰高低与组分浓度有关，峰 越高越窄越好。 二、色谱图中的基本术语 ? 标准偏差σ — 峰高 0.607 倍处的色谱峰宽的一半。 ? 半峰宽 Y 1/2 — 峰高一半处对应的峰宽。 Y 1/2 =2.354 σ ? 基线宽度 Y — 色谱峰两侧拐点所作切线在基线上 的距离。 Y =4 σ 4 、色谱 峰面积 A — 色谱峰与峰底所围的面积。 3 、色谱峰的宽度 （ 1 ） 死时间 t 0 —— 不被固定相吸附或溶解的组分流经 色谱柱所需的时间。 （ 2 ） 保留时间 t R —— 组分流经色谱柱时所需时间。 （ 3 ） 调整保留时间 t ? R —— 扣除了死时间的保留时间。 t ? R =t R -t 0 **t ? R 体现的是组分在柱中被吸附或溶解的时间， 更合 理的反映了被测组分的保留特性。 5 、色谱保留值 — 定性的依据 （ 5 ） 死体积 V 0 —— 指色谱柱在填充后，柱管内固定 相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间 的空间以及检测器的空间的总和。当后两相很小可 忽略不计时， 死体积就是色谱柱中的所有空隙的总 体积 。死体积与死时间关系： V 0 = t 0 F 0 式中， F 0 为柱后出口处流动相的体积流速。 （ 6 ） 保留体积 V R —— 指从进样开始到被测组分在柱后 出现浓度极大值时所通过的流动相体积 。 V R = t R F 0 （ 7 ） 调整保留体积 V ? R —— 扣除了死体积的保留体积。 V ? R =V R ? V 0 =t ? R F 0 （ 8 ） 相对保留值 —— 在相同操作条件下，组分 2 对另一 参比组分 1 调整保留值 之比。 1 , 2 r 色谱流出曲线的意义： ? 色谱峰数 = 样品中单组份的最少个数； ? 色谱保留值 —— 定性依据； ? 色谱峰高或面积 —— 定量依据； ? 色谱保留值或区域宽度 —— 色谱柱分离效能评价指标； ? 色谱峰间距 —— 固定相或流动相选择是否合适的依据。 三、分配平衡 在一定温度和压力下，组分在流动相和固定相之 间