《生物物理学》紫外－可见吸收光谱.ppt

二.紫外光谱的特点 生色团——在多数情况下，吸收光子产生电子 的激发是一个较小的范围，通常称 为生色团，即对光产生吸收的基团。 C=C，C=O，C≡C 生色团结构不同，电子跃迁类型也不同。 助色团——有些原子或基团，本身不能吸 收大于200nm的光波，但它与 一定的生色团相连时，使生色 团所产生的吸收峰向长波方向 移动，并使吸收强度增加。 1. 化合物的鉴定 鉴定的方法 2. 纯度的检验 比较法 * 紫外-可见吸收光谱是样品对紫外-可见光（200nm---800nm）的吸收，吸收光的能量对应电子能级之间的能量差，因此吸收紫外-可见光引起的是样品分子电子能级之间的跃迁——电子光谱。 基本原理 紫外-可见吸收光谱是样品对紫外-可见光的吸收。 当入射光与样品分子相互作用并产生对入射光的吸收时，测量到的透射光的强度与入射光强度之差即为样品对入射光的吸收。 Io It A=lg（Io/It） 紫外吸收光谱所对应的电磁波波长短，能量大，反映分子中价电子能级跃迁的情况，主要用于共轭体系及芳香族化合物的分析。 2. 但是由于谱峰宽，重叠多，而不是像红外吸收光谱或核磁共振谱那样得到的是各个特定化学键的峰。 三.吸收定律及紫外-可见吸收谱的基本参数 吸收谱：样品的吸收度随入射光波长变化的曲线 两个重要参量： 吸收峰的峰位λmax 峰位的吸收度Amax 吸收定律描述的是物质对入射光吸收的定量关系，称为Beer-Lambert定律： A=lg（Io/It）=ξCL ξ：摩尔消光系数 C：样品浓度 四.紫外-可见吸收光谱的测量 光源 单色器 样品室 检测器 放大器 计算机及输出设备 五.紫外-可见吸收光谱应用举例 物质的紫外吸收光谱基本是分子中生色团及助色团的特征，而不是整个分子的特征，如果物质组成的变化不影响生色团和助色团，就不会显著地影响其吸收光谱，如甲苯和乙苯具有相同的紫外吸收光谱。 外界因素如溶剂的改变也会影响吸收光谱， 在极性溶剂中某些化合物吸收光谱的精细结构会消失，成为一个宽带。所以只根据紫外光谱是不能完全确定物质的分子结构，还必须与红外、核磁等方法配合才能得到可靠结论。 利用紫外光谱可以推导有机化合物的分子骨架中是否含有共轭体系，如CH2=CH-CH=CH2 ，CH2=CH-CH=O ，CH2=CH-C≡N ，苯环等，利用紫外光谱鉴定有机化合物远不如利用红外有效，因为紫外光谱特征性不强。 苯丙氨酸 酪氨酸 色氨酸 具有环状共轭双键 与标准物、标准谱图对照： 将样品与标准物以同一溶剂配制相同浓度溶液，并在同一条件下测定，比较光谱是否一致。 吸收波长和摩尔吸收系数： 由于不同的化合物，如果具有相同的发色团，也可具有相同的紫外吸收波长，但是它们的摩尔吸收系数是有差别的。如果样品和标准物的吸收波长相同，摩尔吸收系数也相同，可认为样品和标准物是同一物质。 如果有机物在紫外可见光区没有明显的吸收峰，而杂质在紫外区区有较强的吸收，则可利用紫外光谱检验化合物的纯度。 3. 样品浓度的测定 根据吸收定律: A=εcl 同一物质的消光系数ε是一定的，因此在光径相同的样品池中，A与样品浓度c成正比。 标准曲线 配置一系列不同浓度的标准溶液，在波长最佳处分别测定标准溶液的吸光度A，然后一浓度为横坐标，以相应的A为纵坐标绘制出标准曲线。 *