园艺学报正版-拟南芥mir828基因的克隆及其对番茄的遗传转(精).pdfVIP

园艺学报 2013,40(12:2419–2428 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 拟南芥At-pri-miR828基因的克隆及其对番茄的遗传转化 贾小云1,于治芹1,*,梁建萍1,唐贵良1,2,3,**,金雷皓1,张莉4,贺立 4,李润植4,** (1山西农业大学生命科学学院,山西太谷 030801;2密歇根理工大学生物科学院,美国霍顿 49931;3河南农业大学,郑州 450002;4 山西农业大学农学院,山西太谷 030801 摘 要:MicroRNA828(miRNA828是一种新近发现的生物学功能还未全面研究的miRNA 。为从不同角度阐明miRNA828 的生物学功能,从拟南芥中克隆到At-pri- miR828基因并构建了该基因过量表达 的植物表达载体pC2300-pOT2-At-pri- miR828,通过农杆菌介导的叶盘法将pC2300-pOT2-At-pri-miR828 导入异源植物番茄品种‘Ailsa Craig’中。PCR鉴定结果显示,外源基因At-pri- miR828 已成功整合到转 基因番茄基因 中,共获得9个转基因株系,67株转基因植株。定量PCR检测结果 显示,与野生型番茄 植株相比,转基因植株中miR828 的表达量显著增加,而生物信息学所预测的miR8 28靶基因Sly-myb-like1 的表达水平则相应降低。花青素含量测定结果显示,miR828过量表达的转基因 番茄植株花青素含量明显 低于野生型植株,表明miR828参与了番茄花青素的生物合成调控。 关键词:番茄;miR828;Sly-myb-like1;花青素;实时定量PCR 中图分类号:S 641.2 文献标志码:A 文章编号:0513-353X(201312-2419-10 Cloning of Arabidopsis At-pri-miR828 Gene and Its Genetic Transformation into Tomato JIA Xiao-yun1,YU Zhi-qin1,*,LIANG Jian-ping1,TANG Gui-liang1,2,3,**,JIN Lei- hao1,ZHANG Li4, HE Li-heng4,and LI Run-zhi4,** (1College of Life Sciences,Shanxi Agricultural University,Taigu,Shanxi 030801,China;2Department of Biological Sciences,Michigan Technological University,Houghton,MI 49931,USA;3Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,China;4College of Agriculture,Shanxi Agricultural University,Taigu,Shanxi 030801,China Abstract:MicroRNA828(miR828is a newly identified small RNA whose biological functions are still not very clear. To explore the biological functions of miR828,particularly in tomato,the At-pri- miR828 gene was isolated from Arabidopsis thaliana,and cloned into the corresponding site of the pCAMBIA2300 to construct the plant expression vector pC2300-pOT2-At-pri-miR828. This At-pri-miR828 收稿日期:2013–06–29;修回日期:2013–11–20 基金项目:国家自然科学基金项目山西省青年基金项目(2011021032- 2; 山西省留学基金项目(2011051;山西省高等学校优秀青年学术带头人项目(2012;山 西人才引进与