高效液相色谱法 (hplc).pptVIP

11 高效液相色谱法 (HPLC) ;自学“薄层色谱法”讨论题; HPLC是在经典液体柱色谱的基础上, 在色谱理论指引下，加以改进而发展起来的。特别是GC迅速成为一种仪器分析方法和社会需要分离分析难挥发复杂样品促进了HPLC的发展。近年来它以6-8%的增长率发展，目前年发表论文数已超过GC。2000年仪器销售全球第一。;特性;HPLC和经典LC比较;※ 经典LC填料的缺陷 填料通常是粒度大、范围宽、不规则, 不易填充均匀, 扩散和传质阻力大, 谱带展宽加大。它存在致命弱点：速度慢、效率低和灵敏度低。 ※ HPLC填???（高效固定相） 颗粒细、直径范围窄、能承受高压。达到传质阻力小, 分离效率高。早期HPLC的固定相用涂渍的方法制备，df大，这和GC一样，会大大降低色谱柱的柱效。现代HPLC填料多用键合固定相，其固定相膜很薄，因而大大提高了柱效。 (高效固定相带来什么新问题？); 使用高效填料带来两个新问题： ★柱流动阻力大大增大，需要采用高压泵输液 ★表面能很大，采用专业的装柱技术 目前经典LC主要用于制备，若用于分析则采用脱机或非连续检测。 ※ HPLC的特征 采用高效色谱柱、高压输液设备和高灵敏度检测器, 从而实现了高效、高速和高灵敏度、定量准确, 达到可与GC相媲美的分离分析性能。特别是结合计算机技术， HPLC已成为高度自动化和智能化的现代分析仪器。; 历史上出现不同的HPLC名称： ★高压液相色谱 (High Pressure Liquid Chromatography) ★高速液相色谱 (High Speed Liquid Chromatography) ★高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography) 总之，HPLC与经典LC相比, 使用时更方便, 对操作者的依赖性更小。HPLC的高重现性和连续的定量检测导致了定性和定量分析结果具有较高的准确性和精密度。 经典LC的特点：简便，填料一次使用。 ;;高效液相色谱仪方框图;旋转式六通阀 a)取样位（load）b)进样位（injection）; 一般来说，色谱和电泳仪的仪器流程基本相同。从构成仪器的功能块可分为六大系统：流动相供给和输送系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录或数据处理系统和辅助控制系统。由于流动相的性质不同，流路系统的仪器结构有所不同。但记录和数据处理系统相同。 ◆ 色谱检测器 ◆ 色谱数据处理 ;流动相供给和输送;色谱检测器（对流出物进行连续检测）; 检测器的线性、灵敏度和柱外效应三个基本特性直接影响色谱定量分析的准确度、精密度和再现性。 ◆ 检测器的线性范围 大部分厂商都声称它们的检测器在一定的浓度范围内是线性响应。实际上检测器的线性方程可表示为：y = a c? , 只有在三个数量级的浓度范围内满足0.98 ? ? ? 1.02的线性响应的检测器才是线性的。 ◆ 灵敏度 色谱分析中有三种不同的灵敏度表示法, 检测器本身的灵敏度, 整个色谱体系的浓度灵敏度和质量灵敏度。 对于定量分析来说, 重要的是色谱体系的灵敏度, 因为它还包括柱子和仪器的其它部分的影响。; 检测器的灵敏度(CD), 实际上指检测限, 即通常指相当于两倍噪音信号的溶质浓度。而色谱体系的最小检测限应是柱外效应10%的最大进样体积所对应的二倍于噪音峰高所对应的样品浓度。而色谱分析最重要的是色谱体系的质量灵敏度, 最小可测量： m = 2?CCD , ?C是柱内效应的标准偏差。 或 m = 6.25?e(1＋k) , ?e是柱外效应的标准偏差。 ◆ 检测器的色区展宽 对于毛细管气相色谱和高效液相色谱，检测器的色区展宽是柱外效应的一个主要来源。一般仪器厂商在设计时已把检测器的色区展宽减少到最低程度。 ;色谱数据处理;● 峰的检测 峰的检测和判别是依据在基线的讯号水平上，预设一个“阈值”，超过该值时，判别为峰可开始检测。一般采用下面两种方式判别峰讯号的变化：;???? 保留时间和峰面积的计算; 色谱仪自动定性和定量分析 定量计算是把各种计算公式编制成应用软件存入计算机，通过键盘来选择所需方法。微处理机在定量计算时, 一般通过保留值来识别峰。但由于各种因素的影响, 在重复多次分析中, 保留值会有一定的变化, 可采用下述两种方法确定保留值的变化范围。;色谱数据处理机和色谱工作站的差别;色谱智能化和专家系统简介;色谱柱（固