人教版高中生物课件选修一课题微生物的实验室培养.ppt

课题 1 微生物的实验室培养 常见的三种细菌典型形态 A. 球菌 B. 杆菌 C. 弧菌 （一）培养基：具体配方可以不同，但一般都含有水、 碳源、 标 准 培养基类型 固体培养基 氮源和无机盐。 配制特点 加入琼脂较多 加入琼脂较少 不加入琼脂 由已知成分配制而成， 培养基成分明确 由天然成分配制而成， 培养基成分不明确 添加某种指示剂或化学药品 添加（或缺少）某种化学物质 主要应用 微生物的分离、计数等 观察微生物运动、鉴定 菌种、保藏菌种等 工业生产，连续培养 菌种分类、鉴定 工业生产 鉴别不同种类的微生物 培养、分离出特定的 微生物 物 理 半固体培养基 性 质 液体培养基 化 学 组 成 目 的 用 途 合成培养基 天然培养基 鉴别培养基 选择培养基 选择培养基 可抑制细菌、放线 菌细胞壁主要成分 肽聚糖的合成 其细胞壁是由纤 维素、几丁质、 葡聚糖组成 加入青霉素的培养基 : 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基 : 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基 : 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基 : 分离自养型微生物 加入四环素、卡那霉素等抗生素的培养基 : 分离导入了目的基因的受体细胞 菌落 : 单个或少数细 菌在固体培养 基上大量繁殖 时，就会形成 一个肉眼可见 的，具有一定 形态结构的子 细胞群体，叫 菌落。 菌落是鉴定菌 种的重要依据。 （二）无菌技术 1. 无菌技术的概念： 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有 防止杂菌污染的方法。 2. 消毒与灭菌的概念及两者的区别 消毒定义： 是指使用较为温和的物理或化学方 法杀死物体表面或内部的部分微生 物（不包括芽胞、孢子）。 灭菌定义： 是指使用强烈的理化因素杀死物体内 外所有的微生物，包括芽胞和孢子。 3. 常用的消毒与灭菌的方法： 消毒的方法： 1 、煮沸消毒法：100℃煮沸 5 ～ 6min 2 、巴氏消毒法： 70 ～75℃下煮 30min 或80℃下煮 15min 是指用紫外线（能量）照射杀 3 、用体积分数为 50% ～ 70% 酒精溶液等进行皮肤 消毒 灭菌的方法： 4 、氯气消毒水源 1 、灼烧灭菌 5 、紫外线消毒 2 、干热灭菌： 160 ～170℃下加热 1 ～ 2h 灭微生物的方法，紫外线不仅 能使核酸、蛋白质变性，而且 能使空气中氧气产生微量臭氧， 从而达到共同杀菌作用。 3 、高压蒸气灭菌： 100kPa 、121 ℃下维持 15 ～ 灭菌的方法： 1 、灼烧灭菌： 2 、干热灭菌： 160 ～170℃下加热 1 ～ 2h 。 3 、高压蒸气灭菌： 100kPa 、 121℃条件下维持 15 ～ 30min 。 思考： 1. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外 来微生物污染外，还有什么目的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 2. 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。 如果需要，请选择合适的方法。 （ 1 ） 培养细菌用的培养基与培养皿 （ 2 ） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （ 3 ） 实验操作者的双手 答：（ 1 ）、（ 2 ）需要灭菌；（ 3 ）需要消毒。 三、实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌） 配方： 操作步骤： 1. 计算 2. 称量 3. 溶化 4. 灭菌 5. 倒平板 倒平板技术 讨论： 1. 培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能 用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥 形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒 平板了。 2. 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3. 平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后 的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可 以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4. 在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在 皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养 微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的 培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养 微生物。 （二）纯化大肠杆菌 接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法 ①平板划线法 : 通过接种环在琼脂固体培养基表面连 续划线的操作 , 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基 的表面 . 在数次划线后 , 可以分离到由一个细胞繁殖而 来的肉眼可见的子细胞群体 , 这就是菌落 . 不能使用脱 脂棉，否则 容易吸水， 造成污染。 一旦划破，会造成划线不均匀，难以 达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形 成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生 长，会形成一个条状的菌落。 划