ELISA灰区的设置及质控方法要点.docxVIP

ELISA 灰区的设置及质控方法 ELISA 测定的阳性判断值，通常是将大量阴性和阳性人群的测定数据进行统计分析后确定 的，其确定依据为判断结果的假阳性和假阴性率最低。 在阳性判断值周围一定范围内之外的 测定结果可归为可疑，亦即 ELISA 测定的 “灰区 ”。“灰区 ”的大小可用统计学方法确定。测定 结果处于 “灰区 ”的样本，可通过确认试验或追踪检测来确定到底是阳性还是阴性。 ”。“灰区 ” 的大小可用统计学方法确定 ?? 具体是怎么确定的，。 或者大概粗略的方法计算是怎么样的呢？？高手在哪呢 ELISA“灰区 ”是把定量分析的正常 值范围引入定性分析而建立的概念。 灰区的设置有二种： （1 ） C.O×（ 1±C ）， C 为该试剂的批内 C ( 一般在 15-20% 间）； （2 ） C.O±2S ，S 为实验室做室内质控 ROC 的 S。 另外，个人认为： ELISA“灰区 ”对于不同项目和应用的领域不同 ,其设置不能一概而论。根据 美国疾病控制中心（ CDC ）对美国 Ortho 的抗 HC 检测的 ELISA 试剂盒进行研究，发现只 有检验结果 S/CO≥3.8 时，高度预示 HC 抗体真阳性状态；若检验结果 S/CO3.8 ，存在较 高的假阳性。 在血站系统的献血员抗 HC 筛查用上述两种灰区的设置方法没有什么不可； 如果临床实验室抗 HC 的灰区也按前者设置， 势必存在较多的假阳性， 如何设置灰区应该是 值得研究和商榷的。 这位老师好，不好意思， 本人愚昧， 还不是很清楚这两种方法在实际的 应用，可否举一个小例子。比如HBsAg0.5 是阳性，如果测量得吸光度是 0.4 的话怎么判 断，结果是阴性，但是是有很明显颜色的。在血站系统这样的血就不敢用，怎么解决呢，我 们经常遇到测量阴性但是有颜色的标本，用不同厂家的试剂或是同种试剂重复实验还是一 样，又担心存在弱抗体的问题。 怎么解决呢，万分感激国内试剂测 HBSAG 的 cutoff 值一般不会达到 0.5 ，除非不做空白。 其 cutoff 的公式一般为 NC*2.1 。我只是举例。别找问题以外的事情来说呀，我等答案等得着急第三章 ELISA 技术的质量控制 概述 Engall 和 Perlmann 于 1971 年 首 先 建 立 了 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 （ enzyme linked immunosorbent assay,ELISA ）。随着科技的发展， ELISA 在抗原、抗体、酶、固相载体及 包被技术等方面都有较大的进步， 其灵敏度和特异性均大大提高。 由于该技术具有简便、 快 速、经济等特点，因而已被广泛应用于各行业。尽管如此， ELISA 在应用过程中仍然存在 着许多难点，必须严格控制才能保证检测的质量。 ELISA 质量保证是一个复杂的过程，许多重要的环节都影响到检测的质量。现分述如下： 一、方法学的影响 ELISA 测定模式包括以下几种：双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、 IgM 抗体捕捉法、 竞争抑制法， 其中竞争抑制法因受操作时差所引起的不公平竞争等因素的影响， 结果重复性 较差，质量较难控制。 二、试剂因素 1.试剂的选择 免疫检测的原理均基于抗原抗体反应。 由于该反应过程受多种因素的影响， 如普遍存在基质 效应、 交叉反应等， 因而检测结果难以溯源， 不同方法、 不同试剂之间甚至同一试剂不同批 号间结果均缺乏可比性。 试剂质量在很大程度上决定了检测的水平， 因此在引入新项目之前 必须对试剂进行严格的评估。 试剂的评估有以下几个步骤： ⑴确定开展该项目的必要性； ⑵ 了解该项目现有的检测方法和原理；⑶在了解试剂的组成基础上选择多家试剂盒进行比较， 判断标准首选参考方法或参考物质， 其次为临床的满意度及权威机构的报告如各级室间质量 评价、 CDC 报告等；⑷定期对检测结果进行追踪反馈直至最终认可该试剂。 2.试剂的准备 不同批次的 ELISA 试剂在制作过程中很难保证质量完全一致，即使是通过批批检的项目其 检测结果也存在差异， 因此必须选择和订购长批号的试剂， 并保证保存条件。 严格执行这一 标准可以避免因试剂批号改变而重新建立质控体系及重新评估试剂的复杂过程， 并且能够保 证结果的稳定性；对于效期短、 使用率低的试剂， 应当小量分装， 每次使用则取分装部分即 可，避免反复冻融造成试剂的失效。 试剂使用前必须平衡至室温， 否则会影响检测下限。 未用完的室内质控品及本次不需使用的 试剂应密封并及时放回冰箱保存。 三、样本因素 标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素， 前者包括类风湿因子、 补体、异嗜性 抗体、自身抗体、溶菌酶等，后者包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时