SDS-PAGE电泳的标准操作规程.pdfVIP

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2021-01-31 发布于湖南
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SDS-PAGE电泳的标准操作规程.pdf

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SDS电泳的标准操作规程（编号： 039 ） 1、目的及适用范围 SDS电泳的分离原理，是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS ）按重量比结合成复合物，使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的净电荷，消除了蛋白分子的电荷效应，使蛋白按分子大小分离，主要用于蛋白质分子量的测定、蛋白质混合组分的分离和蛋白质亚基组分的分析等方面。 2、主要仪器恒压或恒流电源、垂直板、制胶模具 3、试剂及配制方法试剂配制方法或要求 H O 电阻率不低于 18.2 M ? .cm 2 1.5 M Tris-HCl 1.5 moL/L Tris-HCl 缓冲液， pH 8.8 30% Acrylamide 30% 丙烯酰胺溶液（避光保存） 10% SDS 10% SDS 溶液 10% APS 10% 过硫酸铵溶液（临用前配制） TEMED TEMED 溶液 1 M Tris-HCl 1 moL/L Tris-HCl 缓冲液， pH 6.8 5 ×电极缓冲液 Tris 15.1 g、甘氨酸 94 g 、 SDS 5 g，水稀释至 1 L ，pH 8.3 2 ×Loading buffer 100 mM Tris-HCl （pH6.8 ）、4% SDS 、0.2% 溴酚蓝、 20% 甘油，用于非还原 SDS电泳，如用于还原 SDS电泳，则再加 2% β-巯基乙醇 5 ×Loading buffer 250 mM Tris-HCl （pH6.8 ）、10% SDS 、0.5% 溴酚蓝、 50% 甘油，用于非还原 SDS电泳，如用于还原 SDS电泳，则再加 5% β-巯基乙醇考马斯亮蓝染色液 0.1% 考马斯亮蓝 R250、 25%异丙醇、 10%冰醋酸，水稀释至 1 L 考马斯亮蓝脱色液醋酸 100 mL 、乙醇 50 mL 、水 850 mL 4 、操作步骤 4.1 制胶：取合适的密封垫片和两块已清洁的干燥的玻璃板，组装成灌胶的模具，按下表制成分离胶，灌入模具内一定高度（一般离玻璃板上端 3.5 cm ），小心加水或异丙醇封顶（约 0.5 cm 高），室温下聚合（温度不同，聚合时间不同， 20 ℃大约需 30 min ）。待分离胶溶液聚合后，用滤纸吸 78