牛磺猪去氧胆酸调节Th17_Treg细胞平衡治疗溃疡性结肠炎的作用机制.pdfVIP

摘要 摘要 溃疡性结肠炎（Ulcerativecolitis，UC）属于炎症性肠病（Inflammatoryboweldisease， IBD）的一种，是慢性、非特异性肠道疾病，其特征在于肠道炎症和粘膜组织损伤。目 UC UC 前， 的发病机理尚不清楚，学者普遍认为免疫系统的异常应答是引起 发病的关 键。目前，Th17/Treg 细胞失衡所致的免疫异常被视为UC 的重要发病机制。猪胆粉是 我国传统的中药，其在治疗痢疾和泄泻方面具有良好疗效。前期研究发现，猪胆粉结合 2.4.6- Trinitrobenzene sulfonic acid TNBS 型总胆酸能有效减轻 三硝基苯磺酸 （ ， ）引起的 结肠组织损伤，抑制炎症的发生，对UC 有很好的治疗作用。同时发现猪胆粉结合型总 胆酸中的主要活性成分牛磺猪去氧胆酸 （Taurohyodeoxycholic acid，THDCA）也具有良 UC 好的抗溃疡性结肠炎活性。然而，到目前为止猪胆粉结合型胆酸治疗 的作用机制仍 不明确。据此，本研究基于Th17/Treg 细胞平衡，系统研究猪胆粉中主要结合型胆酸 THDCA UC 治疗 的作用机制。 本研究中建立TNBS诱导的UC 小鼠模型，经THDCA 给药治疗后，处死小鼠，制 备结肠组织切片，HE 染色后进行组织病理学分析；采用ELISA 法检测结肠组织中髓 过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）活性，同时检测Th17 细胞因子白介素（Interleukin， IL -6 IL-17A IL-21 IL-22 Tumornecrosisfactor TNF -α Treg ） 、 、 、 、肿瘤坏死因子 （ ， ） 和 细胞因子IL-10、转化生长因子-β （Transforming growth factor-beta，TGF-β）的含量；采 RT-PCR Th17 IL-6 IL-17A 用 法检测结肠组织中 细胞因子 、 和转录因子维甲酸相关孤儿 核受体γt （Retinoic acidreceptor-related orphan receptorγt，RoRγt）、信号转导与转录激活 因子3 （Transducersandactivatorsoftranscription 3，STAT3）mRNA 表达，同时检测Treg IL-10 TGF-β / 3 Forkhead/winged helix 细胞因子 、 和转录因子叉状 翼状螺旋转录因子 （ transcription factorp3，Foxp3）、Smad 家族成员3（Smad familymember 3，Smad3）mRNA 表达；采用Westernblot 法检测结肠组织中RoRγt、STAT3、Foxp3和Smad3 蛋白表达； 采用RT-PCR 法检测脾脏淋巴细胞中Th17 细胞因子IL-17A、转录因子RoRγt 及Treg 细 胞因子IL-10、转录因子Foxp3 mRNA 表达；流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中 Th17/Treg 细胞的比例。实验结果显示：（1）THDCA 能降低UC 小鼠脾脏指数、结肠指 2 THDCA IL-6 IL-17A IL-21 IL-22 数，减轻结肠组织炎症；（） 能降低结肠组织中 、 、 、 和TNF-α的含量，增