primer_5.0使用方法+使用说明.docx

Primer5.0 中文使用说明 key 5685 Primer Premier5.0是由加拿大的Premier公司开发的专业用于PCR或测序引物 以及杂交探针的设计，评估的软件，和Plasmid Premier2.02 一起是该公司推出 的最新的软件产品。其主要界面同样也是分为序列编辑窗口( Gen eta nk )，引 物设计窗口( Primer Design )，酶切分析窗口( Restriction Sites )和纹基分析 窗口( Motif)。这里我们主要介绍其引物设计功能，其他功能的介绍请参看 Plasmid Premier2.02。 打开程序首先进入的是序列编辑参看，与Plasmid Premier相比, 其多了一个语音校正的功能，即在输入序列的时候，程序自动将碱基读出，以便 用户进行校正，保证输入的正确和快速。 点击该界面的按钮即可进入到程序的引物设计窗口。 GC%1* opt GC% PCI MJ 12.*MAtalMfFi*MtPfirninaWTMr 12.* MA talMf Fi*Mt Pfirnina WTMr Adria- j Faiind | 111 nujiiLl J ；i 口」站川 1 ! IM“|| | | F仙11件| 1 F Qundl I Anti tensfi G? rATTTCCGJlCCT S 1111 d I Jd 该界面共分为四层，最上面一层左面是5个控制按钮，用于实现引物设计中的各 种功能，包括引物自动寻找，寻找结果查看和引物编辑；右边是观察两个引物在 模板上结合位置的直观图以及对正链还是负链引物进行选择； 第二层是显示模板 和引物序列及二者间的配对情况的显示； 第三层是显示两个引物的各种参数，包 括给引物的打分，引物以及产物的起始位置、长度、 Tm值、GC^消光系数、简 并性；最后一层是给出的有关于引物的二聚体结构、 发卡结构、错配情况和引物 间二聚体结构的预测，左边是显示是否存在以上各种对 PCF扩增有影响的结构, 右边显示的是这些结构的位置，结构细节和稳定能，利用这些参数可以对引物作 出可靠的评价。 下面是根据模板序列寻找引物的界面，在该界面中可以设定所要搜索的引物的类 型，包括PCR引物，测序引物和杂交探针以及引物所在的链； 另外也能设定搜索 引物的范围，以及最终PCF产物的长度和引物的长度等。 认r.u心f并通过来点击按钮来设置一些搜寻参数： 这些参数包括引物的Tm值，GC比，有简并性碱基，3端稳定性，引物的 稳定性，重复序列，二聚体/发卡结构和与模板及可能的杂质 DNA（需要从另外 的序列文件中读入）之间的错配情况，这些参数的设定可以根据要求变化，程序 本身根据一定的标准分成从极高严谨性到极低严谨性 5个档次。该程序对引物的 自动搜索过程是采用的排除法，根据用户设定的引物范围和产物长度所规定区域 内，所有的符合设定的引物长度的寡核苷酸都被视为可能的引物， 然后根据以上 各个参数逐步去除不符合条件的寡核苷酸， 经过这种层层剔除的筛选，最终找到 符合用户所设定标准的引物，如果找不到合适的引物可以逐步降低要求来进行进 一步搜寻。 搜寻到引物结果最终显示在下面的窗口中: Ruling Scq No Length Product Si?r M? k 二 1 94 61 298 29 18 120 厂 卩 铝 久：：価 3 80 15 2W ft 194 r 4 n 21 Ifi r 5 13 434 r se 299 1H 240 r ▼I 11* p?trs foun4h S? Ke在结果窗口中给出了程序给该对引物的打分 （rati ng ）和上下游引物的起始位置 S? Ke 和长度以及产物的长度。通过直接点击各对引物在相应引物搜寻界面中相应的显 示引物的各种信息。包括其各种参数和各种可能存在的不利结构。 其中用File菜单中的Parameter命令可以对系统参数，PCF反应条件和程序打 分系统进行设置，以帮助用户根据自己的特殊要求来进行引物设计， 其中反应条 件按照引物浓度，单价离子浓度，Mg离子浓度，Na盐浓度等。而打分系统是参 照的以下公式： 利用该打分系统可以为对引物进行有效评估和和在引物之间进行对比选择提供 有效的有效的依据。 最后还可以在利用引物编辑窗口对程序自动找到的或手工找到的 引物序列进行编辑，以便用户能在引物引入突变及加入特定的酶切位点， 并对修 改后的序列的二聚体结构、发卡结构和错配进一步评估。其中是对修改后的引物 再次搜寻找出其最合适的引发位置。 除了以上的直观地对引物进行基本的设计和评估功能外， 该程序还提供了多 种数据报告，主要通过 Report菜单和Graph菜单中命令来实现： iaaa/ DiHitf R4j^rt CStbi*