PC R产物的胶回收分离纯化.docVIP

　PＣR产物得胶回收分离纯化　 一、实验仪器 1、琼脂糖凝胶电泳系统 ２、紫外观察分析仪 3、离心机 ４、单面刀片 5、恒温水浴锅 二、试剂 DＮA回收试剂盒 ２、50×TAE 3、dｄH2O 步骤 １ 在紫外灯下切分含ＤNA得琼脂糖块,尽可能除去多余得琼脂糖。放入1.5ml离心管中、 ４。 称量胶块重量,计算胶块体积。计算胶块体积时,以 1　ｍg=1 μl 进行计算。 5. 　向胶块中加入胶块融化液 DR－I Ｂufｆeｒ,DR-Ｉ Bufｆer 得加量如下表: 　 　 　　凝胶浓度 　 　 ＤR－I Bｕffｅｒ　使用量 　 　 　　 １。0％ 　 　 3 个凝胶体积量 　 1.０%～１。5% 　 ４ 个凝胶体积量 　　 　　 　 １、5%～2。0％　 　　 　　　 ５ 个凝胶体积量 6。 均匀混合后 75℃加热融化胶块(低熔点琼脂糖凝胶只需在　４5℃加热)。此时应间断振荡混合,使胶块充分融化(约 6～１0　分钟)。注)胶块一定要充分融化,否则将会严重影响 DNA 得 回收率。 ７、 向上述胶块融化液中加入ＤＲ—I　Buffer量得1/2体积量得　DR-ＩＩ Buｆｆer,均匀混合。当分离小于　400　bｐ 得 DＮＡ 片