痰及呼吸道标本检验程序.doc

痰及呼吸道标本检验程序 1 ?检验目的：检出痰及支气管灌洗液中的病原微生物，进行体外抗生素敏感试验，为临床诊断与 抗生素选择提供依据。 2?范围：适用于呼吸道标本。 3?程序原理：根据涂片、培养基上菌落形态特点、优势菌群分布选择可能的病原菌进行生化反应 鉴定和药敏试验，通过微生物分析手段，为临床提供诊断依据和抗生索选择° 4?所用设备：V1TEK2全自动细菌鉴定/药敏分析系统、C02培养箱、II级生物安全柜、厌氧箱、 恒温培养箱、显微镜、酒精灯、接种环、移液器、吸头。 5.试剂：血液培养基、巧克力培养基、麦康凯平板培养基、沙保弱培养基及根据临床需求增加特 殊的培养基、革兰染色液、抗酸染液、VTTEK2鉴定卡、手工生化鉴定试剂、K-B药敏纸片、MTC 药敏板、无菌盐水、反应板、各种培养基、触酶试剂、氧化酶试剂、凝固酶试剂等。 6?标本采集：见临床微生物标本采集和送检程序（YLJY-WSW-PF-6-8）o 7.检验程序： 7.1直接涂片检查 呼吸道标本必须做涂片检查，可确定标本是否来自下呼吸道，初步判定是否 有病原菌存在、细胞增生情况以及病原菌与细胞的关系。 7. 1.1痰涂片及标本来源判断（1）挑取脓性或血部分制备2张涂片，一张做革兰染色，另一张 根据需要做其它染色。（2）革兰染色低倍镜观察白细胞和上皮细胞数量：白细胞＜10,上皮细胞 ＞25,确定为上呼吸道标本，不宜做培养，电话通知主管医生要求重留标本。如果临床坚持继续, 在屮请单和结果报告单注明；若白细胞＞10,上皮细胞＜25时，要参照高倍镜下的情况进行区分: ①有少量扁平上皮细胞、少量白细胞、3种以上细菌，说明为唾液，不宜培养。②见数量不等的 白细胞或纤毛柱状上皮细胞或二者同在，有一种细菌或两种，记录结果，同时进行培养。（3）标 本证实来自下呼吸道后，油镜观察细菌着色、形态及排列，有经验技师可通过镜检做出初步病原 学诊断，如葡萄球菌、肺炎链球菌、真菌。 如果临床医生坚持对不适宜标本进行培养，要特别注明。 判断是否适宜培养的痰显微镜检查结果见下表 分类 白细胞 上皮细胞 判断 A 25 10 合格 B 25 25 合格 C 10 25 不合格 7.1.2 一般细菌涂片检查：革兰染色镜检，跟据着色、形态及排列大致可以初步推断菌属或种， 如见到革兰阳性球菌、呈堆或葡萄状排列，疑似葡萄球菌；如见到瓜子形态、矛头状、尖端相背 的成双排列并有荚膜的革兰阳性球菌疑似肺炎链球菌等。 7.1.3抗酸染色涂片检查：结核分枝杆菌抗酸阳性（樱红色）、细长略弯、有时呈分枝状、多成 堆排列。 抗酸杆菌报告方式 -：全视野或（100个视野）未找到抗酸杆菌 + ：全视野发现3?9个 ++：全视野发现10?99个 +++:每视野发现1?9个 ++++:每视野发现10个以上 全视野发现1-2个时报告抗酸菌个数 7. 1.4放线菌及奴卡菌涂片检查：将痰液用生理盐水反复洗涤数次，如含血液则加蒸懈水溶解红 细胞，然后挑取黄色颗粒（硫磺颗粒）或不透明的着色斑点，置玻片上覆以盖玻片，轻轻挤压， 置高倍镜下观察其结构，如见中央为交织的菌丝，其末端粗杆形呈放线状排列。然后揭去盖玻片, 自然干后做革兰及抗酸染色镜检。如查见中央部分菌丝为革兰阳性，而四周放射的末梢菌丝为革 兰阴性，抗酸染色为非结核性者，可报告：找到疑似放线菌。如查见革兰染色反应与放线菌相同, 但抗酸染色为弱抗酸性（止常脱色时间红色完全退色，故脱色时间要短），可报告：找到疑似奴卡 菌。 7. 1.5厌氧菌涂片检查：涂片染色同一般细菌，镜检时注意有芽胞的革兰阳性杆菌，可能是梭状 芽胞杆菌属。如见芽胞位菌体不膨大，排列呈竹节状，要注意炭疽芽胞杆菌、两端尖的革兰阳性 杆菌，可能为梭杆菌及革兰阴性无芽胞杆菌；如痰有恶臭可能有拟杆菌，根据细菌的着色、形态、 排列做出初步诊断° 7.1.6白喉棒状杆菌：查见革兰阳性棒状杆菌，排列不规则，用异染颗粒染色有明显异染颗粒， 则可作出初步报告。 7. 1.7奋森螺旋体：革兰染色后见有淡红色疏螺旋体，有3?10个稀疏不规则的螺旋，呈波状， 可做初步报告。 7. 1.8麻风杆菌：疑似麻风病人的鼻粘膜涂片中可见细长、两端略尖的抗酸杆菌，集于细胞内或 成束排列。 7. 2.培养检查 7. 2. 1培养前处理 仃）痰的洗净：由于痰含有正常菌群，影响病原菌检出，采取以下方法减少正常菌群。将痰加入 10-20m 1无菌生理盐水的试管中，轻轻振荡5?10秒，将洗涤的盐水倒掉，以同样方法反复洗两 次，最后将剩余的脓痰接种在培养基上或进行均质化后接种。 （2） 痰的均质化：以SPUTOSAL痰消化液（购于英国OXOTD公司）作痰液均质化。向痰内加等量痰 消化液，振荡3-5分钟，使痰液均质化，而对细菌培养无影响。 （3） 肺泡灌洗液:重要的是要进行定量